cd20与钙离子内流.docx

cd20与钙离子内流 c20是人类b细胞表面的独特特征，但d20在b细胞表面的生理影响尚不清楚。CD20在B淋巴细胞表面以寡聚体形式存在,现有实验证明CD20在B细胞表面形成的是四聚体。CD20与B细胞抗原受体(B cell antigen receptor,BCR)的膜型Ig M(s Ig M)存在相互作用已经被证实,B细胞活化后,BCR-CD20复合物会解离,磷蛋白、钙调素结合蛋白会暂时被招募到CD20,从而参与胞内信号的传导。钙离子流动对细胞的生物学功能有重要影响,钙池调控钙离子进入(store-operated calcium entry,SOCE)通过钙离子释放激活的钙离子(calcium-release-activated calcium,CRAC)通道来提高细胞内的钙离子浓度,是淋巴细胞提高胞内钙离子浓度的主要方式。越来越多的证据表明CD20参与了SOCE,CD20对于胞内钙离子浓度有重要的调节作用。 1 sd20和bcr 1.1 不同分离的b细胞bcr CD20分子属疏水、4次跨膜蛋白,相对分子质量(Mr)为33×103~35×103。CD20抗原表达于90%以上的B淋巴瘤细胞和正常的B淋巴细胞,而不表达于造血干细胞、原始B淋巴细胞、正常血细胞以及其他正常组织。 BCR是一种由异源寡聚体形成的复合体。目前证实BCR至少由2部分组成,一部分为s Ig M,另一部分为Igα和Igβ。BCR是B淋巴细胞发育、分化和活化的重要调节分子,有2个基本功能:一方面作为免疫效应细胞直接参与免疫应答,介导体液免疫;另一方面作为特异性的抗原提呈细胞选择性地捕获抗原并提呈给T细胞,协同和调节T细胞免疫应答。 1.2 cd20t的表达 Bubien等通过化学交联细胞表面的蛋白分子,经CD20免疫共沉,得到Mr分别为70×103和140×103的复合物,因为CD20单体的Mr为33×103~35×103,所以复合物可能是CD20的同源寡聚体。Deans等用标记的CD20和截短的CD20,通过免疫共沉淀证明CD20形成的是同源四聚体。 为了检测每一个寡聚物中CD20单体的数目,Deans等把一个C端缺少20个氨基酸残基的截短的CD20(CD20TR)和天然的CD20分子(CD20WT)的c DNA共同转染到HEK293细胞(5μg CD20WT的c DNA和15μg CD20TR的c DNA),使得CD20WT低表达,CD20TR高表达。通过免疫共沉淀(用抗-CD20C,抗CD20的C端的抗体)和免疫印迹(用抗-CD20N,抗CD20的N端的抗体)得到CD20WT与CD20TR条带相对密度比例是3∶1,符合CD20能形成四聚体的推测。 Deans等还用一个HA标记的CD20(CD20-HA)和CD20WT的c DNA共同转染HEK293细胞,得到了相似的结果,2种分子的条带相对密度比例也是3∶1,进一步证明了CD20同源四聚体的推测。 值得注意的是,这种四聚体结构在细胞表面的离子通道中很常见,这样的结果使研究者们更加相信CD20就是一种钙离子通道,但随后的研究表明CD20自身并不形成离子通道。 1.3 cd20与bcr的相互作用 通过用毛地黄皂苷(digitonin)溶解细胞,免疫共沉淀得到的CD20复合物Mr大于200×103,超过了CD20四聚体的大小(约140×103),表明CD20不仅能够形成同源四聚体,还存在其他的分子与CD20相互作用。为了验证细胞膜表面的其他何种分子与CD20相互作用,将BJAB细胞的膜蛋白用生物素标记,再裂解细胞,进行CD20的免疫共沉淀,用抗生物素蛋白进行免疫印迹,得到Mr分别约为80×103、68×103、45×103、35×103和29×103的5条带。35×103条带被证明是CD20分子;68×103的条带不是在每一次试验中都出现,而且有时在对照泳道也出现;45×103的条带不确定(质谱分析没有结果);80×103和29×103条带被证明分别是s Ig M的重链(s Igμ)和轻链(s Ig L)。换用Ramos细胞进行同样实验也得到了相同的结果。这些实验结果表明CD20与BCR的s Ig M存在相互作用。 B细胞活化后,BCR-CD20复合物会解离,磷蛋白、钙调素结合蛋白会暂时被招募到CD20,从而参与胞内信号的传导。而且,CD20与s Ig M结合不依赖胆固醇,但是其中有脂筏(lipid rafts)的参与。 胆固醇存在于真核细胞的细胞膜上,其含量一般不超过膜脂的1/3。胆固醇在调节膜的流动性、增加膜的稳定性,以及降低水溶性物质的通透性等方面都起着重要的作用。脂筏是细胞膜上富含鞘磷脂和胆固醇的细胞膜微区。脂筏在B细胞活化的过程中起重要作用,可以作为BCR传递信号的一个平台,也可能在抗原的传递过