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elisa方法检测绵羊外周血部分免疫指标 0 材料的选育和引进 [研究意义]这种疾病给养羊业带来了巨大损失，包括防疫、药物治疗、死亡、生产性能下降和产品污染。随着育种程度的提高, 以及集约化饲养方式的转变, 绵羊抗病力随之降低, 常引发一些疾病, 尤其是传染性疾病, 严重影响养羊业健康、可持续的发展。据统计, 由疾病造成的经济损失约占畜牧业产值的12~15%。因此, 寻找一条安全可靠且经济可行的疾病控制途径已是当务之急。抗病育种已成为当前疾病控制的研究热点, 培育出具有较强免疫能力和抗病力的家畜禽是动物育种学家的重要目标之一。【前人研究进展】研究表明不同绵羊品种或个体在疾病易感性或抗性方面存在遗传上的差异, 如包虫病抗性、抗胃肠线虫和耐受能力等。但由于测定绵羊的抗病力较为困难, 免疫应答可作为抗病力的间接选择指标, 因此可利用一些在活体测得的免疫指标作为抗病选育的间接指标。哈萨克羊是新疆最古老的地方绵羊品种, 具有体质健壮, 耐粗饲, 耐严寒, 抗病力强, 对新疆生态环境有很强的适应性。萨福克羊原产于英国, 用南丘羊与黑头有角诺福克绵羊 (Norfolk) 杂交, 于1859年培育而成, 是世界优秀的肉羊品种, 其特点是体格大、生长速度快, 世界上大部分生产肥羔肉的国家都用此品种作为终端父本用于杂交生产羔羊。【本研究切入点】揭示我国地方绵羊品种、国外引进绵羊品种及杂交后代的抗病力及免疫力的差异是开展抗病育种的基础, 而目前的相关研究较少。新疆农垦科学院于2001年引入萨福克羊, 应用绵羊多胎性状主效基因分子标记辅助选择 (marker-assisted selection MAS) 方法, 经10余年成功选育出兼具高繁殖力和肉用性能的多胎萨福克新品系, 新品系的培育为研究绵羊天然免疫力及抗病力提供了良好的素材。【拟解决的关键问题】研究拟通过对引入的萨福克羊、培育的多胎萨福克羊、地方品种哈萨克羊以及多胎萨福克羊和哈萨克羊杂交羊的部分免疫指标进行比较研究, 试图反映品种间一般免疫力或抗病力的差异, 同时也探索一般免疫力的性状测定指标, 为绵羊一般抗病力基因的筛选以及开展抗病育种奠定基础。 1 材料和方法 1.1 多胎萨福克羊和哈萨克斯坦羊fps测定 材料为新疆农垦科学院种羊场同一饲养条件下健康的185只10月龄羔羊, 采样时间为2011年9月23日。其中萨福克羊39只 (12♂, 27♀) , 多胎萨福克羊55只 (14♂, 41♀) , 哈萨克羊63只 (28♂, 35♀) , 多胎萨福克羊和哈萨克羊F1杂交羔羊28只 (以下简称萨哈F1;9♂, 19♀) , 采集绵羊颈静脉血4m L, 分为2份, 一份不抗凝, 分离血清, 于2 500 rpm离心15 min, 取上清分装, 置-20℃冰箱中保存备用, 用于免疫指标测定。一份用10%EDTA抗凝, 用于白细胞总数 (WBC) 的测定。 1.1.2 试剂盒 绵羊Ig G、IFN-α、IFN-γ、IL-1β、IL-2、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、MHC ELISA检测试剂盒为上海蓝基生物科技有限公司产品。酶标仪 (model 550) 为美国Bio-Rad产品。 1.2 方法 1.2.1 elisa试验 血清中11个免疫指标, Ig G、IFN-α、IFN-γ、IL-1β、IL-2、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、MHC的测定, 根据ELISA试剂盒说明书进行检测。 1.2.2 白细胞计数 外周血白细胞计数 (WBC) 按照《兽医临床诊断学实习指导》进行。 1.3 va的比较分析 绵羊品种间免疫指标测定数据应用spss13.0 ANOVA进行均值比较, 结果以平均值 () 表示, 用Duncan氏多重比较方法分析。用spss13.0 Bivariate进行免疫指标间相关分析, 并作差异显著性分析。 2 结果与分析 2.1 外周血免疫指标比较 经ELISA测定萨福克羊、多胎萨福克羊、哈萨克羊以及萨哈F1羔羊外周血免疫指标, 其中, 外周血中IFN-γ含量、IL-1β含量、IL-2含量、IL-6含量、IL-8含量、IL-12含量和MHC含量在绵羊品种间差异不显著 (P0.05) , 绵羊性别间外周血中IFN-α含量、IFN-γ含量、Ig G含量、IL-1β含量、IL-2含量、IL-5含量、IL-6含量、IL-8含量、IL-10含量、IL-12含量、MHC含量和WBC在绵羊品种间差异不显著 (P0.05) 。萨福克羊外周血中IFN-α含量和WBC显著低于多胎萨福克羊、哈萨克羊以及萨哈F1羔羊 (P0.05) ;萨福克羊外周血中Ig G含量、IL-5含量、IL-10含量显著低于哈萨克羊和萨哈F1羔羊 (P0.05) , 萨福克羊与多胎萨福