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rp-hplc法测定盐酸二甲双胍缓释片的含量及有关物质 盐酸二甲酯（1）是一种口服抗高血压药物，用于治疗2型糖尿病。为提高其用药安全性,近年来开始进行1缓释片的研究。中国药典2000年版收载的1原药及其普通片的质量标准中,仅采用TLC法对原药中双氰胺进行控制,而对其它杂质未作规定。为更好地检测缓释制剂中的有关物质及可能产生的降解产物,保证其内在质量,我们参考1的药物动力学测定方法,建立了1缓释片的含量及有关物质的HPLC测定方法。 1 分析方法及仪器 Agilent 1100型高效液相色谱仪(安捷伦公司);ChromQuest色谱工作站(美国热电分析仪器有限公司)。1(北京双鹤药业股份有限公司);1缓释片(自制,批号:010301、010302、010303)。 2 方法和结果 2.1 流动相ph-pcr法 色谱柱Kromasil ODS C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相 甲醇-5 mmol/L磷酸二氢铵水溶液(用磷酸调pH至3.5,含0.1% SDS)(65∶35);流速1.0 ml/min;检测波长232 nm;进样量10 μl。 2.2 氧化破坏样品 取1缓释片,用流动相制成0.5 mg/ml的贮备液,分别加1 mol/L盐酸溶液或1 mol/L氢氧化钠溶液适量,室温放置24 h,中和后,作为酸及碱破坏样品。另取贮备液,加30%双氧水适量,室温放置24 h,作为氧化破坏样品。另取1缓释片,分别于160 ℃高温放置6 h及4500lx强光下放置24 h,作为高温及光破坏样品。 2.3 高温、酸及碱条件对降解产物的影响 取1缓释片、原料(双氰胺)及破坏试验样品,用流动相制成0.5 mg/ml的样品溶液,进样测定。结果表明:样品在高温、酸及碱条件下均有降解产物产生,并可与主峰分离(图1),而氧化、光照条件下未见降解产物峰。表明在本色谱条件下,原料及破坏产生的降解产物均能与1有效分离,方法的专属性良好。 2.4 标准曲线及线性回归法 取1约60 mg,精密称定,置50 ml量瓶中,加流动相溶解并定容,摇匀,分别精密量取0.1、0.5、1、2、5、10、20 ml置25 ml量瓶中,加流动相定容,摇匀。取10 μl进样测定,记录峰面积,以浓度(c)对峰面积(A)进行线性回归,得回归方程为:A=1.0660×104c+4.3856×104,r=0.9999。表明在浓度0.005～1.0 mg/ml范围内,1峰面积与浓度呈良好的线性关系。 2.5 检测限制 在本色谱条件下,按信噪比为3∶1测得检测限为0.1 ng。 2.6 精密度测试 取”2.8”项下对照品溶液,连续进样5次,求得RSD为0.5%。 2.7 加标回收率及rsd 分别取1约20、25、30 mg及处方量的辅料,精密称定,按“2.8”项下操作,结果高、中、低3个浓度的平均回收率为99.7%,RSD为0.5%。 2.8 含量测定实验 取1缓释片20片,精密称定,研细,精密称取细粉适量(约相当于125 mg),置50 ml量瓶中,加流动相适量,超声10 min使溶解,定容,摇匀,过滤。取续滤液作为供试品溶液。取供试品溶液适量,加流动相制成浓度为0.005 mg/ml的对照溶液。取对照溶液10 μl注入色谱仪,调节工作站量程,使1峰高为满量程的15%。取供试品溶液10 μl,进样,记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍;色谱图中如有杂质峰,按主成分自身对照法计算有关物质含量。另取1适量,加流动相制成浓度为0.5 mg/ml的对照品溶液,分别取供试品溶液和对照品溶液依法测定,按外标法计算含量,结果见表1。 3 流动相和辅料分离 3.1在流动相筛选中,分别考察了SDS、磷酸二氢铵浓度、pH值、流动相系统对1检测的影响。结果表明,加入0.1% SDS,柱效明显改善,双氰胺保留时间(2.5 min)不变,而1保留时间从2.5 min调整为8 min左右,与双氰胺分离良好。流动相系统改用乙腈-水系统,1为前延峰,柱效明显降低。磷酸二氢铵浓度增加,1出峰时间略微缩短,柱效有所降低。pH在3～5之间对柱效和有关物质分离无明显影响。 3.2中国药典对1的有关物质检测及1普通片的含量测定都以水为溶剂。由于1缓释片所用辅料中含大量高粘度的缓释材料,采用水为溶剂,过滤困难,且易对色谱柱造成损坏,因此改用流动相为溶剂,辅料亦不干扰样品测定,且可同时进行有关物质检测和含量测定,方法简单易行。 3.3在1缓释片研究时,采用HPLC法测定有关物质,并与药典收载的TLC法进行了比较。结果表明,与TLC法相比,HPLC法具有灵敏度高、可准确定量的优点。1缓释片加速试验(40 ℃、相对湿度75%)3个月,经两种方法检测,无明显降解产物产生,质量稳定。