液相色谱法检测苯甲酸山梨酸糖.docx

液相色谱法检测苯甲酸、山梨酸、糖 精钠的疑难详解 苯甲酸、山梨酸、糖精钠是权衡食品卫生质量的重要指标，苯甲酸、山梨酸的检测参照GB/，糖精钠的检测参照GB/T，即可展开实验。 苯甲酸、山梨酸、糖精钠虽是较常有的检测项目，可是要获得一个正确靠谱的结果，也存在必定的难度，很多生手常出现因对方法理解发生误差而检测犯错的事故。笔者依据自己多年该方面工作的实质经验出发，以苯甲酸、山梨酸为着要点，从样品前办理、检测仪器的选择、超标时的判断等几个易出问题的方面，进行了详尽的论述。 样品前办理的注意事项 GB/和GB/在文字构造上出缺点，在波及用仪器法测定苯甲酸、山梨酸、糖精钠时，只叙述了液体样品的前办理方法，没有波及对固体样品的前办理。 食品样品常常含有大批的油脂、蛋白质，对提取极为不利；如办理不洁净也会污染色谱柱，影响检测工作。这种样品办理的要点在于怎样找到一种较理想的积淀剂，尽量清除待测样品中的油脂、蛋白质，且不影响待测物组分的回收率。 GB/使用5％硫酸铜溶液积淀蛋白，关于蛋白质含量较低的食品尚可，关于 豆粉、奶粉、月饼等高油脂、高蛋白样品则积淀成效不理想。如用10％钨酸钠溶液作为积淀剂，成效好些；如用10％亚铁氰化钾溶液和20％醋酸锌溶液则成效更理想（这是笔者当前用过最理想的积淀剂）。 详细操作步骤以下： 取必定量样品，捣碎，利用四分法原理称取样品克于50ml比色管中，加水 20ml，浸泡、振荡平均，加入氢氧化钠溶液(1mol/L)ml，加入%亚铁氰化钾溶液，20%乙酸锌溶液，定容，振荡使其充分混匀后,用滤纸初滤除掉积淀物,初滤 液过μm微孔滤膜,采集滤液于样品瓶中，样品办理液和标准有溶液各进样5uL测定。 1/6 用这种方法简单易行，接触有机试剂少，重复性和回收率都令人满意；弊端是必定要用液相色谱法检测，有必定限制。 检测仪器的选择 固然液相色谱仪操作起来比气相色谱仪要复杂，但笔者建议如条件允许仍尽量用液相色谱法检测。原由以下： 液相色谱法所用的样品办理方法远比气相色谱法简单，且不需使用有机试剂。特别关于高油脂样品（如月饼）若采纳碱化－排油－酸化－提取－挥干－溶解等步骤，再上气相色谱仪检测，工作量大，试剂毒性也大，且结果因为办理步骤太多而难以保证正确。用液相色谱法还可同时达成糖精钠项目的检测，而气相色谱法只好做苯甲酸、山梨酸的检测。 液相色谱仪所用的紫外检测器比气相色谱仪的氢火焰检测器敏捷，可进行更低含量的检测。 如用二极管阵列检测器，还可协助定性，这更是气相色谱氢火焰检测器不行比较的。 采纳气相色谱仪时的注意事项 GB/所用的气相色谱柱为5％DEGS＋1％磷酸固定液的60－80目ChromosorbWAW，。这种柱有性能稳固、重复性好、保存时间稳固的长处， 但同时也有稳准时间较长的弊端。 该柱的合用的样品提取溶剂为石油醚或乙醚，假如用甲醇或乙醇，则溶剂峰拖尾效应较大，对山梨酸的测定有影响。 如用毛细管柱，能获得更好的峰形和敏捷度，但其稳固性及特异性不如填 充柱。一般可用非极性毛细管柱，内径，10－15m长度。色谱条件可能需用程 序升温。 在气相色谱仪上的出峰序次为先出山梨酸，后出苯甲酸。 糖精钠不可以直接用气相色谱进行检测，一定衍生化后才能汽化进样。 2/6 采纳液相色谱仪的注意事项 依据GB/，流动相应为5：95的甲醇：醋酸铵溶液，可是这个比率仅是个参照值，我们在工作中应依据实质状况进行调理。 为何用甲醇溶液？甲醇有两个作用，（1）防腐，液相色谱柱最怕流动相长菌，特别霉菌。 甲醇可使蛋白质变性，有杀菌作用。（2）调理流动相极性，这是最重要的一点。甲醇在溶液中比率的较小变化都会使苯甲酸、山梨酸、糖精钠的保存时 间发生显然的改变，所以能够经过改变流动相中甲醇含量，以调理这几个组分的出峰和分别，以获得较理想的色谱图。 5：95是一个通用的比率，如减少甲醇含量，苯甲酸、山梨酸、糖精钠的出 峰时间变慢，扩散效应增大，峰形较差，但这三组分的分别状况较好。如增添甲醇含量，苯甲酸、山梨酸、糖精钠的出峰时间提早，扩散效应较小，峰形尖利，但这三组分的分别状况可能受影响，产生重叠。在选择条件时，只好经过 实验手段，如配制3：97，4：96，5：95，6：96，7：93的流动相，综合考虑分别成效和分别时间选择最正确比率。 不一样柱的最适比率不一样，举例来说，色谱科企业的液相柱最适比率为4： 96，而岛津企业液相柱的最正确比率为7：93。就是同一根柱，一年前和一年后的 极性也会有变化，需调理溶液配比。 为何使用醋酸铵溶液？加入醋酸铵是为了调理离子强度，使待测物的峰形不致于变坏。假如独自检测苯甲酸和糖精钠，加不加醋酸铵没有什么关系，都能够获得较好的峰形；可是检测山梨酸时流动相必定要加醋酸铵，不然得不到一个完好的色谱峰，峰形呈破碎状。醋酸铵溶液浓度不需严