兔瘟组织灭活苗的制作.pptVIP

流行病学诊断 临床诊断 病理诊断 本文档共24页；当前第1页；编辑于星期一\23点49分 微生物(Microorganism) 形体微小、结构简单，须借助于光学显微镜或电子显微镜进行观察。 病毒(包括噬菌体)； 细菌、放线菌、立克次氏体、支原体、衣原体、螺旋体等； 真菌：包括酵母菌（单细胞）、霉菌（多细胞）； 单细胞的藻类以及原生动物等。 →非细胞型微生物 →单细胞原核微生物 →真核微生物 本文档共24页；当前第2页；编辑于星期一\23点49分 细菌(bacteria)的细胞形态 1、球菌 单独存在时为圆球形，几个细菌联在一起时其接触面稍为扁平。按其分裂方向和分裂后排列状态，可以分为：单球菌、双球菌、四联球菌、八叠球菌、链球菌、葡萄球菌。 2、杆菌 细胞呈杆状或圆柱状，各种杆菌的长度与直径比例差异很大，有的粗短，有的细长，短杆菌近似球状，长杆菌近似丝状。一般来说，同一种杆菌其粗细比较稳定，而长度则经常因培养时间、培养条件不同而有较大变化。有的杆菌很直，有的稍弯，有的两端截平如炭疽芽孢杆菌，有的略尖，有的半圆。 本文档共24页；当前第3页；编辑于星期一\23点49分 （三）革兰氏染色 革兰氏染色法于1884年由丹麦医生Gram创立，是延用至今的经典染色法。 经革兰氏染色后可以把全部细菌分为G+和G-两大类。 染色机制：与细菌细胞壁的结构和组成有很大关系。 G+细菌：肽聚糖层厚，含量多，经乙醇处理后使之发生脱水作用而使孔径缩小，结晶紫与碘的复合物保留在细胞内而不被脱色，复染后不着色，保持结晶紫的颜色； G-细菌：肽聚糖层很薄，含量少，脂肪含量高，经乙醇处理后部分细胞壁脂类可能被溶解并改变其组织状态，细胞壁孔径变大或通透性增加，不能阻止溶剂透入，酒精将结晶紫与碘的复合物洗脱，细菌被脱色，经复染后染成红色。 本文档共24页；当前第4页；编辑于星期一\23点49分 细胞壁 革兰氏阳性菌 (G+) 革兰氏阴性菌 (G-) 厚度与强度 厚、致密、坚韧 薄、疏松 肽聚糖数量、含量 多层、含量高、占细胞干重40—90% 单层、含量低、占细胞干重5—10% 脂类含量 少、占细胞干重1-4% 多、占细胞干重11-22% 磷壁酸（垣酸） + - 脂多糖、磷脂、脂蛋白 - + 肽聚糖 脂蛋白 磷壁酸 外膜 本文档共24页；当前第5页；编辑于星期一\23点49分 染色操作步骤—涂片固定 滴生理盐水 挑取菌苔一环 涂片 热固定 干燥 取菌液一环 涂片 干燥 本文档共24页；当前第6页；编辑于星期一\23点49分 革兰氏染色法 1. 涂片、干燥及固定 2. 初染：在做好的涂面上滴加草酸铵结晶紫染液，染1-2分钟，倾去染液，流水冲洗至无紫色。 3. 媒染：先用新配的路哥氏碘液冲去残水，而后用其覆盖涂面1分钟，后水洗。 4. 脱色：除去残水后，滴加95%酒精进行脱色约25秒，后立即用流水冲洗。 5. 复染：滴加番红染色液，染2分钟，水洗后用吸水纸吸干。 6. 镜检：观察染色结果图。 本文档共24页；当前第7页；编辑于星期一\23点49分 细水冲洗 结晶紫初染2min 碘液媒染1min 95%酒精脱色 20s 蕃红复染 1~2min 细水冲洗 细水冲洗 本文档共24页；当前第8页；编辑于星期一\23点49分 革兰氏染色成败关键： 酒精脱色，脱色不够将G-转变为G+，脱色过度将G+变成G-； 涂片要均匀、薄； 菌龄影响染色，菌龄老、陈旧的细菌培养物，往往G+转变成G-，一般做革兰氏染色用18小时左右的细菌培养物，不要超过24小时，以免影响染色性。 本文档共24页；当前第9页；编辑于星期一\23点49分 油镜操作规程 1. 先用低倍镜和高倍镜观察涂片，待看到目的物后，将其移到视野中央。2. 在涂片上滴一滴香柏油，转动换转器使油镜针对通光孔。3. 使油镜与香柏油接触，这时油镜头几乎与载玻片相接触，切记不能使用粗调，以免压碎载玻片。4. 用细调旋钮慢慢提升镜头高度，直至物像清晰。切勿拧反方向。 5. 观察完毕后，使镜筒远离载物台。取下载玻片。用擦镜纸擦去镜头上的香柏油：先用干的擦镜纸擦1～2次，把大部分油去掉，再用二甲苯滴湿的擦镜纸擦2次，最后再用干擦镜纸擦1次。擦拭时要顺镜头的直径方向，不要沿镜头的圆周擦。擦拭要细心，动作要轻 。 本文档共24页；当前第10页；编辑于星期一\23点49分 五、结果： 绘模式种、自选种镜检油镜视野图（比例、形状准确，注放大倍数，染色特性） G+ (金黄色葡萄球菌) G-（枯草芽孢杆菌） G-（大肠