分子生物学中心法则.pptVIP

3、终止 两复制叉在终止区相遇，形成的连锁体由拓扑异构酶Ⅳ分开。终止子ter和终止蛋白Tus防止复制叉超过终止区过界复制。 本文档共45页；当前第30页；编辑于星期二\10点31分 本文档共45页；当前第31页；编辑于星期二\10点31分 第三节 真核生物DNA的复制 真核DNA的合成的基本过程类似于原核DNA，不同之处： 多复制起点 至少有五种聚合酶αβγδε 端粒的复制依赖于端粒酶 本文档共45页；当前第32页；编辑于星期二\10点31分 （优选）分子生物学中心法则 本文档共45页；当前第1页；编辑于星期二\10点31分 Reverse transcription 中心法则及补充 本文档共45页；当前第2页；编辑于星期二\10点31分 第19章 DNA复制与修复 （一）复制方式：半保留复制。 物质基础：双螺旋结构 本文档共45页；当前第3页；编辑于星期二\10点31分 氮标记技术证实了DNA的半保留复制 以15NH4Cl为唯一氮源培养大肠杆菌，连续培养12代，使所有DNA标记上15N； 在普通培养基（14N)培养一代后，所有DNA密度介于14N ～15N之间； 培养两代后， 14N和14N ～15N杂合分子等量出现。 继续培养， 14N分子增多。 本文档共45页；当前第4页；编辑于星期二\10点31分 (深蓝: 15N) (粉红: 14N) DNA半保留复制的证据 培养于普通培养液 继续培养于 普通培养液 含15N-DNA的细菌 普通DNA 重DNA 第一代 中等密度DNA 第二代 普通DNA 中等密度DNA 本文档共45页；当前第5页；编辑于星期二\10点31分 本文档共45页；当前第6页；编辑于星期二\10点31分 本文档共45页；当前第7页；编辑于星期二\10点31分 第二节 原核生物DNA的复制 DNA的复制实际上就是以DNA为模板在DNA聚合酶作用下，将游离的四种脱氧三核苷酸(dATP,dGTP,dCTP,dTTP,简写为dNTP)聚合成DNA的过程。 这是一个非常复杂的酶促反应，需要许多种酶和蛋白质参与。 本文档共45页；当前第8页；编辑于星期二\10点31分 一、DNA复制所需原料 1） 底物：dATP，dGTP，dCTP，dTTP， 总称为dNTP 2） DNA聚合酶，DNA-pol 3） 模板（template）：解开成单链的 DNA母链 4） 引物（primer）：RNA引物 5） 其他酶和蛋白质因子 本文档共45页；当前第9页；编辑于星期二\10点31分 1、DNA聚合酶－复制的基本酶 作用特点：从引物游离3’－OH开始加入脱氧核苷酸，需要底物，引物，模板，能量，Mg2+。 DNA聚合酶为DNA指导的酶。 本文档共45页；当前第10页；编辑于星期二\10点31分 原核细胞DNA聚合酶539 DNA聚合酶Ⅰ DNA聚合酶Ⅱ DNA聚合酶Ⅲ 5’→3’聚合活性 + + + 聚合速度nt/s 16~20 7 250~1000 对dNTP亲和力 低 低 高 5’→3’外切活性 + - + 3’→5’ 外切活性 + + + 功能 修复;去除引物；填补空缺 协助修复 主要复制酶 DNA聚合酶Ⅳ和Ⅴ：与突变存活有关的酶。 本文档共45页；当前第11页；编辑于星期二\10点31分 DNA-pol 的 5′?3′聚合作用 3’ 5’ 5’ 3’ 3’ 5’ DNA-pol 5’ 3’ OH P 本文档共45页；当前第12页；编辑于星期二\10点31分 DNA-pol I 5′? 3′外切活性 切除引物，切除突变片段 DNA-pol I 3′?5′外切活性： 校读（proofread）功能 5’ 3’ A G 5’ 3’ 本文档共45页；当前第13页；编辑于星期二\10点31分 小片段 大片段 （Klenow fragment） 5 ‘ →3 ’聚合功能， 3 →5 外切酶活性 5 →3 外切酶活性 DNA pol I的酶切片段 E J P N M L H I O R Q G C D B F A K 本文档共45页；当前第14页；编辑于星期二\10点31分 引物酶(Primase) 5′ 5′ DNA合成需在RNA引物的基础上进行。 RNA引物 5′ 3′ 5′ 3′ 本文档共45页；当前第15页；编辑于星期二\10点31分 解除DNA高级结构的酶与蛋白： DNA复制从起始点开始复制时，局部的DNA双链必须打开，主要靠解螺旋酶（helicase)的作用，打开后的单链还需要单链结合蛋白与其结合，防止复性。 在复制叉向前移动时造