免疫测定方法学和临床应用.pptVIP

目前我国多采用第三代抗-HCV ELISA试剂,其敏感性超过99%,虽然目前缺乏判断其敏感性的金标准,但对于免疫功能正常的HCV RNA阳性感染者,抗-HCV检出率也高于99%。 丙肝病毒抗体 * 本文档共45页；当前第30页；编辑于星期二\9点52分 补充/确认实验:重组免疫印迹 (RIBA) 检测原理：以待测血清中的HCV抗体和分别固定在硝酸纤维素膜、醋酸纤维素膜、尼龙膜等载体上的不同HCV抗原之间的特异性结合反应为基础,测定待测样品中抗-HCV的存在和有无。 丙肝病毒抗体 * 本文档共45页；当前第31页；编辑于星期二\9点52分 因为HCV的各种抗原分别被单独固化在载体的不同位置上,因此,该项检测可以区分待测样品对HCV不同抗原的不同反应。 目前RIBA HCV已经得到FDA的认可,成为抗-HCV确认的标准。 临床意义：RIBA阳性的患者中75-80%为病毒血症(HCV RNA);RIBA阳性而血清中没有HCV RNA时提示可能为既往感染。 丙肝病毒抗体 * 本文档共45页；当前第32页；编辑于星期二\9点52分 实时荧光监测PCR 检测原理：在PCR扩增反应管内加入了标记有两种染料的针对靶序列的探针,每当一次扩增反应中一条探针与靶序列退火结合后,整个反应体系就会增加一个单位的荧光.从而得出每一次扩增循环结束后产物的量. 丙肝病毒抗体 * 本文档共45页；当前第33页；编辑于星期二\9点52分 临床意义： 特异性强：抗-HCV阳性并不能代表现症感染,丙型肝炎的诊断标准是HCV-RNA. 敏感性高：可发现抗-HCV阴性者HCV感染. 阳性出现早：在“窗口期”没有抗-HCV产生,但可检测出RNA. 可指导用药：为疗效观察及预后判断提供指标. 丙肝病毒抗体 * 本文档共45页；当前第34页；编辑于星期二\9点52分 * * 免疫分析技术简介 乙肝病毒标志物定性、定量检测常见问题 抗HCV检测问题 ANA.ENA检测问题 TP-Ab检测问题 TB-Ab检测问题 免疫测定方法学临床应用 * 本文档共45页；当前第1页；编辑于星期二\9点52分 免疫分析技术 早期的免疫分析技术: 免疫扩散、免疫电泳、直接及间接血凝、被动血凝、补体结合实验 特点:这些检测方法成本低、结果易于判断、技术上便于掌握,但不便于免疫检测自动化 后来的免疫分析技术: 放射性核素标记、荧光免疫标记、酶免疫标记、稀土元素标记及化学发光分子标记 特点:快速、灵敏、特异、易于测定等实验室的免疫检测自动化奠定了基础 * 本文档共45页；当前第2页；编辑于星期二\9点52分 待测物质浓度与检测手段 临床化学分析 10 -12 10 -9 10 -6 10 -3 10 -0 pg/mL ng/mL mg/mL mg/mL g/L 免疫分析 Therapeutic Drugs Thyroid Hormone Fertility Hormone Allergy Cancer Markers Infectious Disease Vitamins Serum Proteins 免疫分析技术 * 本文档共45页；当前第3页；编辑于星期二\9点52分 放射免疫的创立 1959 美国Yalow Berson 1960 英国 Ekim’s 1977 获诺贝尔医学生物学奖 医学生物学超微量分析的里程碑 免疫分析技术 * 本文档共45页；当前第4页；编辑于星期二\9点52分 放射免疫的精髓 R：放射性核素示踪 高灵敏 不直接探测待测物，而探测待测物上的标记信号 (标记物的放大效应) RIA I：免疫学反应 高特异 废除以往沿用的无机或有机试剂，代之以抗体为结合剂 免疫分析技术 * 本文档共45页；当前第5页；编辑于星期二\9点52分 放射免疫面临的挑战 半衰期短，限制了药盒使用寿命 由于标记物的不断变化，带来药盒批间、批内较大的差异，标准曲线无法保存备用 反应时间过长(数小时至过夜) 结果测量依靠时间累计，至少每一样品一分钟 其主要的缺陷是： 理论和实践证明其分析的限度是10-7分子/mL或10-12 g/mL，要再提高有困难 以上原因都造成放射免疫无法进行自动化分析 免疫分析技术 * 本文档共45页；当前第6页；编辑于星期二\9点52分 新技术的挑战 放免其必然受到一代新的更灵敏、稳定、快速，而且全自动化的测量技术的挑战。 从90年代开始放免分析在国际上每年以 10~15% 的速度下降，这是事实。一些大型的实验室，标本量大的项目都已逐步应用各种非放免标记的自动化设备来进行分析，这是技术发展的必然规律。 免疫分析技术 * 本文档共45页；当前第7页；编辑于星期二\9点52分 标记