两种精子优选法对正常形态活动精子回收率的对比研究.docxVIP

两种精子优选法对正常形态活动精子回收率的对比研究 精的选择是成功应用于人类和外部精的一个重要因素之一。目前比较成熟的是上游法和密度梯度离心法,目前已广泛应用于生殖医学领域,但其对精子形态、活力以及精子的回收率等方面的优选效果不甚相同,两种优选法优选效果优劣直接与患者的生殖健康相关。为评价两组优选方法的优选效果,本研究对两种优选法效果进行了比较,现将结果报告如下: 1 数据和方法 1.1 病例选择及排除标准 50例精液样本均来自我院生殖中心门诊在2011年10月～2012年10月就诊的患者,患者年龄24～38岁,平均年龄(29.2±4.3)岁,婚后正常性生活2年以上不育,精液检查正常,排除泌尿生殖系统外伤史和遗传病史患者,排除性功能障碍患者;排除明显睾丸、附睾及输精管异常患者;排除严重心肺功能和肝肾功能障碍患者。每份标本将其平均分成上游法组和PureSperm密度梯度离心法组,上游法组与PureSperm法两组患者年龄、性别、病情的严重程度等均相同无差异,具有可比性。 1.2 消毒液的制备 采用禁欲法,患者禁欲2～7 d,取精器或者手淫法将精液置于干燥消毒量杯内,并放置于水浴箱中,保持恒温37℃液化。每份精液分成3份备用,1份进行优选前精子运动参数、 形态等检测,1份进行PureSperm密度梯度离心法优选,另1 份进行上游法优选。 1.3 学习方法 1.3.1 检测系统及设备 37℃ 隔水式恒温箱、TDL-50B离心机、Quinn精子洗涤培养基(ART1020)、Pureception精子分离培养基(含Pureception40%上层分离液、Pureception80%下层分离液)、普通显微镜、二氧化碳培养箱、WLJY-9000型伟力彩色精子质量检测系统。 1.3.2 精子沉淀团的制备 (1)上游法:充分混匀精液,将1mL精液置于15mL的无菌锥形离心管中,在精液上方加入1.2mL培养液形成液层,将离心管倾斜45°,置于37℃、5%二氧化碳培养箱内静置1 h,小心吸取最上层1 mL培养液,加入2 mL培养液稀释,以400 g离心5 min,弃上清,用0.5 mL培养液重悬精子沉淀团 。(2)密度梯度离心法:分别先将1 mL Pureception80%下层、1 mL上层Pureception40%精子分离液加入到离心管中,静置, PureSperm液上下层出现清晰分离界面,将液化的精液充分混匀,取1 mL 液化精液小心覆盖于上层分离液液面上方,400 g离心20 min后弃上清液,分离沉淀,并加入精子洗涤培养基5 mL将其混匀,200 g离心5 min,弃上清液,洗涤两次,用0.5 mL培养液混匀悬浮沉淀精液团后备用。 1.4 引物、精子及动态参数、分布参数等 采用WLJY-9000型伟力彩色精子质量检测系统对精子优选前后精子运动参数进行分析,包括精子活率、精子密度、精子活力及动态参数等。操作方法严格按照仪器生产厂家说明书规定进行。精子形态学分析采用巴氏染色法,计数200条,分析头部、中段和尾端畸形率、计算精子畸形指数(SDI),分别计算正常形态活动精子回收率:处理后(精液量×精子密度×活动率×正常形态率)/处理前(精液量×精子密度×活动率×正常形态率)。 1.5 料的t检验 采用SPSS16.0统计学软件包进行分析,计量资料用xˉ±sxˉ±s表示,比较采用t检验。计数资料采用%形式表示,并采用卡方检验,检验标准设定为a=0.05,P0.05时认为差异有统计学意义。 2 结果 2.1 精子运动参数比较 结果显示,上游法和PureSperm法其优选后a级精子率、a+b级精子率、VCL、VSL、VAP、ALH、BCF、LIN、WOB、STR等指标均明显优于处理前(P0.05),但两组优选法大部精子运动参数比较均无统计学差异(P0.05)。 2.2 两种优选法的比较 结果显示,优选后上游法和PureSperm法其密度、活力、头部、中段和尾端畸形率、SDI均明显优于优选前(P0.05),其中PureSperm法优选后密度明显高于上游法,但活力明显低于上游法(P0.05),活力、头部、中段和尾端畸形率、SDI等两种优选法比较无统计学差异(P0.05)见表2。 2.3 精子回收率 结果显示, PureSperm密度梯度离心法a级活动精子和a+b级精子回收率明显高于上游法(P0.05),差异有统计学意义,PureSperm法优选后对正常形态活动精子回收率明显高于上游法(P0.05),差异有统计学意义。见表3。 3 精子的筛选和回收 国内研究报道,不孕症发病率逐年增高,男性不育的发病率已从8%～10%上升到12%～16%,近年来虽然体外授精(IVF)、胚胎移植(ET)、宫腔内人工授精(IUI)等辅助生殖技术在临床中开展应用给广大少精弱精患者