细胞库建立标准样本.docVIP

细胞库建立概况 一、对细胞库细胞基质总规定 (一)细胞系／株历史资料 1．细胞系／株来源资料 应具备细胞系／株来源有关资料，如细胞系／株制备机构名称，细胞系／株来源种属、年龄、性别和健康状况资料。这些资料最佳从细胞来源实验室获得，也可引用正式刊登文献。 人源细胞系／株须具备细胞系／株组织或器官来源、种族及地区来源、年龄、性别及生理状况有关资料。动物来源细胞系／株须具备动物种属、种系、饲养条件、组织或器官来源、地区来源、年龄、性别、病原体检测成果及供体普通生理状况有关资料。 2．细胞系／株培养历史资料 应具备细胞分离办法、细胞体外培养过程及建立细胞系／株过程有关资料，涉及所使用物理、化学或生物学手段，与否有外源添加序列，以及细胞生长特性、生长液成分、选取细胞所进行任何遗传操作或选取办法等。同步还应具备细胞鉴别、检定、内源及外源因子检测成果有关资料。 应提供细胞培养液详细成分。如使用人或动物源成分，如血清、胰蛋白酶、水解蛋白或其她生物学活性物质，应具备这些成分来源、制备办法、质量控制、检测成果和质量保证有关资料 。 (二)细胞库建立 细胞库建立可为生物制品生产提供已标定好、细胞质量相似及能持续稳定传代细胞种子。 1．原材料选取 建立细胞库各种类型细胞供体均应符合细胞库细胞检定中有关规定。神经系统来源细胞不得用于生物制品生产。 培养细胞用牛血清应来源于无牛脑海绵体脑病流行地 区健康牛群，其质量原则应符合规定(附录XIII D)。 不得使用人血清作为细胞培养液。如需使用人血白蛋白，则须使用有批准文号合格制品。 消化细胞用胰蛋白酶应进行检测，证明其无细菌、真菌、支原体或病毒污染。特别应检测胰蛋白酶来源动物也许携带病毒，如细小病毒等。 用于生物制品生产培养物中不得使用青霉素或β- 内酰胺(β-Lactam)类抗生素。 2．细胞培养操作规定 细胞培养生产人员应定期检查身体。在生产区内不得进行非生产制品用细胞或微生物操作；在同一工作日进行细胞操作前，不得操作或接触有感染性微生物或动物。 3．建立细胞库 细胞库为三级管理，即原始细胞库、主细胞库及工作细胞库。如为引进细胞，可采用主细胞库和工作细胞库构成二级细胞库管理。在某些特殊状况下，也可使用主细胞库一级库，但须得到国务院药物监督管理部门批准。 (1)原始细胞库(PCB) 由一种原始细胞群体发展成传代稳定细胞群体，或通过克隆培养而形成均一细胞群体，通过检定证明合用于生物制品生产或检定。在特定条件下，将一定数量、成分均一细胞悬液，定量均匀分装于安瓿，于液氮或一130℃如下冻存，即为原始细胞库，供建立主细胞库用。 (2)主细胞库(MCB) 取原始细胞库细胞，通过一定方式进行传代、增殖后均匀混合成一批，定量分装，保存于液氮或一130℃如下。这些细胞必要按其特定质控规定进行全面检定，所有合格后即为主细胞库，供建立工作细胞库用。 (3)工作细胞库(WCB) 工作细胞库细胞由MCB细胞传代扩增制成。由MCB细胞经传代增殖，达到一定代次水平细胞，合并后制成一批均质细胞悬液，定量分装于安瓿，保存于液氮或一130℃如下备用，即为工作细胞库。冻存时细胞传代水平须保证细胞复苏后传代增殖细胞数量能满足生产一批或一种亚批制品。复苏后传代水平应不超过批准该细胞用于生产最高限定代次。所制备WCB必要经检定合格，方可用于生产。 4．细胞库管理 每种细胞库均应分别建立台账，记录放置位置、容器编号、分装及贮存安瓿数量，取用记录等。细胞库中每 支细胞安瓿均应注明细胞系／株名、代次、安瓿号、冻存日期，贮存容器编号等。 冻存细胞存活率应在90％以上。冻存后细胞，应至少做一次复苏培养并持续传代至衰老期，检查不同传代水平细胞生长状况。 主细胞库和工作细胞库分别存储。非生产用细胞应与生产用细胞严格分开存储。 (三)细胞库细胞检定 细胞检定重要涉及如下几种方面：细胞鉴别、外源因子污染和内源因子检测、致瘤性检测等。必要时还须进行细胞染色体核型检查。这些检测内容对于MCB细胞和WCB细胞均合用。 建立细胞库实验室应至少进行一次MCB细胞全面检定，检定应涉及：细胞鉴别实验，细菌、真菌检查，支原体检查，外源病毒因子检查等。每次建立WCB后，均应按规定项目进行检定。 1．细胞鉴别实验 新建细胞系／株、细胞库(MCB和WCB)和生产结束时细胞应进行鉴别实验，以确以为本细胞，无其她细胞交叉污染。细胞鉴别实验办法有各种，涉及细胞遗传检测(如特性染色体标志)、遗传标志检测(如DNA指纹图谱、STR图谱、基因组二核苷