女性生育力保存.pptx

女性生育力保存 概述原理技术要点123 -01–概述 什么是生育力保存概念生育力保存（fertility preservation）是指保存卵子或生殖组织的方法和手段，适用于有不孕不育风险的人群和治疗某些疾病可能会影响生育功能的患者为什么做生育力保存 根据数据显示，全球自然人口增长率在逐年下降，并且照这个趋势，我国在2031年后的增长率将成为负增长人口增长率下降 癌症与死亡率 生育功能下降生殖疾病恶性肿瘤其他系统疾病生育年龄推迟社会发展生育观念环境变化生育质量下降生育力低下生育力低下 历史和预测人口 -02–原理 冷冻是来自自然的启示，科学家发现某一种类的青蛙可以在冬季经历零下数十度冷冻，而在春季解冻且机体没有任何损伤研究认识到，这种青蛙冷冻时体内存在丙三醇，代替水为细胞內溶剂，而在春天苏醒后体内丙三醇消失冷冻如何实现生育力保存低温下细胞长期保持“休眠“，在一定条件下细胞复苏 精子冷冻技术发展1954年1983年1986年1991年1994年1996年胚胎冷冻卵母细胞冷冻未成熟卵母细胞体外成熟“三冻”试管婴儿卵巢组织冷冻 精子/睾丸组织保存包括精子保存，睾丸和附睾组织的保存。（常规冷冻、单精子和稀少精子冷冻’）卵子/胚胎保存慢速/快速玻璃化冷冻卵子（成熟，未成熟）、卵裂期胚胎（D2/D3/D4）、囊胚期（3期、4期、5期、6期）。卵巢组织保存是青春期前女性和癌症治疗无法被延迟的保护女性唯一生育力的方法其他方法如放射治疗前的卵巢移位，生殖干细胞移植等来源分类狭义的生育力保存 生育力保存技术国内首例精子冷冻诞生婴儿1983湖南医科大学胚胎冷冻诞生婴儿北京大学第三医院卵母细胞冷冻诞生婴儿北京大学第一医院“三冻”试管婴儿北京大学第三医院单精子冷冻诞生婴儿上海交通大学卵巢组织冷冻诞生婴儿上海长征医院（辅助生殖）国内首例生育力保存技术 -03–技术要点 231降温复温速率冷冻“冷冻三要素”冷冻保护剂细胞 所有能够预防或减轻冷冻复苏过程中胚胎内细胞冷冻损伤的化学成分。 通过脱水、调整渗透压、减少细胞内冰晶的形成并促进玻璃化、稳定细胞内蛋白质、调节细胞外电解质的作用来保护细胞在冷冻复苏过程中免遭损伤。冷冻保护剂01概念02原理 渗透性保护剂可渗入细胞，取代细胞内的水，提高溶液的黏性，弱化水的结晶过程: 二甲基亚枫（DMSO）、乙酰胺(AA)、丙二醇(PROH)、乙二醇(EG)、丙三醇等非渗透性保护剂能溶于水，但不进入细胞，可调节细胞内外渗透压，促进细胞脱水和防止解冻时细胞过度膨胀: 蔗糖、聚乙二醇（PEG）、葡聚糖、聚蔗糖、白蛋白等其他冷冻保护剂（大分子物质）维持胶体渗透压；降低胚胎透明带损伤的机会；提高冷冻液的黏滞系数：白蛋白、聚蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮、右旋糖酐、羟乙基淀粉冷冻保护剂 冰晶形成 冷休克 溶质效应 重结晶 渗透性休克冷冻损伤机制12345冷冻损伤机制 P. Mazur, et al. Cryobiology, 2005(51): 29-53.P. Mazur, et al. Cryobiology, 2007(55): 158-166.低温显微镜与高速摄影仪的完美组合（小鼠）冷冻损伤机制“冰晶效应”： 低温显微镜与高速摄影仪的完美组合（小鼠）冷冻损伤机制“冰晶效应”：首次利用利用高速摄像仪捕捉到了细胞内冰晶生长的瞬间 玻璃化冷冻（Vitrification）抵抗冷冻损伤方法”：指液体在低温时形成“玻璃样”状态，而没有形成冰核和结晶 Mazur, P.,et al., Exp Cell Res, 1972玻璃化冷冻“双因素假说” 关键极快速降温目的玻璃化冷冻对细胞产?较少的冷冻损伤 1983 首例冻胚获得妊娠；1985 首例冷冻囊胚获得活产；目前，胚胎冷冻已经成为IVF实验室的常规技术，也从原来的慢速冷冻转为玻璃化冷冻技术。癌症患者的胚胎冷冻2006年起开始报道。而对于癌症患者和正常人群比较，没有发现获卵数、受精率、活产数和出生缺陷的差异。但癌症患者高质量胚胎数减少，胚胎冷冻需要男方精子，而且，由于抗癌治疗的时限性，很多患者没有时间进行激素刺激过程。需要注意的是，经过一次或者两次化疗过程的患者不建议推荐IVF治疗。一是胚胎数目太少，二事而且可能会增加先天畸形。一、胚胎冷冻 01将胚胎在室温下置入 ES （平衡液） 12 ～ 15min。此过程我们可以看到细胞体积先缩小然后又重新扩大的变化再将胚胎在室温下置入 VS （冷冻液）中 60 ～ 90s ，时间必须很短，因为高浓度玻璃化液对细胞有毒。 将胚胎移到冷冻载体上。最后将冷冻载体投入 LN2（液氮）中冷冻02玻璃化冷冻（胚胎）方法 第1例用冻存的成熟卵母细胞获得活胎是在1986年。21