沙门氏菌检验(现用).docx

沙门氏菌的查验 1．目的 规范沙门氏菌检测方法，使产品查验有据可依。 2．消毒灭菌要求 微生物检测用的玻璃仪器、金属器具及培育基、被污染和接种的培育物等，一定经灭菌后方能使用。 注：本实验采纳湿热灭菌法，吸管、培育皿、培育基等盖好塞子并包好瓶口在高 压灭菌锅中按要求的温度和压力灭菌，一般是121℃（1.5MPa）下灭菌20min。3．原理 沙门氏菌的查验分四个连续阶段： 4．操作步骤 4.1准备工作 配制实验所需的缓冲蛋白胨水、亚硒酸盐胱氨酸培育基（无需灭菌）、HE培育基、三糖铁培育基等，并将准备好的均质杯、吸管、培育皿、大试管等一同灭菌。 4.2前增菌 在无菌环境下，称取25g待检样品放入盛有225ml灭菌好的缓冲蛋白胨水中， . 而后放到36±1℃的恒温培育箱内进行前增菌4-6h;4.3增菌 在无菌环境下，用灭菌好的吸管汲取10ml前增菌液接种与100ml亚硒酸盐胱氨酸培育基中进行二次增菌，恒温培育箱36±1℃，培育18-24h;4.4分别培育 将增菌培育液摇匀，以无菌操作，用直径3mm的接种环挑取一环，划线于表面无凝固水的BS和SS琼脂平板各一个，于36±1℃培育18-24h。察看各个平板 上有无典型或可疑沙门氏菌属的菌落。如无典型或可疑菌落，应再持续培育24 2h。而后察看培育的平板（黄色的菌落是大肠杆菌；蓝绿色或蓝色，产硫化氢，菌落中心黑色或几乎全黑色为可疑沙门氏菌）。 沙门氏菌属各亚属在其余选择性琼脂平板的菌落特点 4.5生化实验 用灭菌好的接种针在培育平板上挑取可疑的沙门氏菌单菌落，接种到三糖铁培育基上，恒温培育箱36±1℃，培育18-24h;典型沙门氏菌培育物斜面显红色（碱性），底端显黄色（酸性），有气体产生，形成硫化氢（琼脂变黑）。 三糖铁培育基变化表 . 肠杆菌科各属在三糖铁琼脂内的反响结果 同时将三糖铁培育基上可疑的菌株，做生化实验，将可疑的沙门氏菌落分别接种于尿素、赖氨酸脱羧等发酵管中恒温培育箱36±1℃，培育18-24h（依据上表进行判断）,将可疑的沙门氏菌补做进一步的生化试验，以下表： 三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶培育基挑选 三糖铁琼脂反响 赖氨酸脱羧酶培 可能的菌属 养基 斜面 基层 产气 硫化氢 K A ＋（－） ＋（－） ＋ 可疑沙门氏菌属 K A ＋（－） －（－） ＋ 可疑沙门氏菌属 A A ＋（－） ＋（－） ＋ 可疑亚利桑那菌 A A ＋（－） －（＋） － 非沙门氏菌属 K K ＋/－ ＋/－ ＋/－ 非沙门氏菌属 备注：K--产碱；A--产酸；＋--阳性反响，－—阴性反响， （－）少见反响，＋/－—阳性或阴性反响 . 三糖铁琼脂和尿素酶琼脂挑选 三糖铁琼脂反响 尿素酶琼脂 可能的菌属 产气 硫化氢 斜面 基层 K A ＋（－） ＋（－） － 可疑沙门氏菌属 A A ＋（－） ＋（－） － 可疑亚利桑那菌 K A ＋（－） ＋（－） ＋ 非沙门氏菌属 A A ＋（－） ＋（－） ＋ 非沙门氏菌属 K K ＋/－ ＋/－ ＋/－ 非沙门氏菌属 备注：K--产碱；A--产酸；＋--阳性反响，－—阴性反响， （－）少见反响，＋/－—阳性或阴性反响 沙门氏菌属反响 序号 生化项目 反 应 沙门氏菌 亚利桑那菌 1 尿素酶试验 － － 2 V-P试验 － － 3 氰化钾试验 － － 4 赖氨酸脱羧酶试验 ＋ ＋ 5 吲哚试验 － － 6 丙二酸钠试验 － ＋ 7 卫矛醇试验 d － 备注：＋--阳性反响，－—阴性反响， d—反响不定 A、靛基质反响 接种后在恒温培育箱36±1℃，培育18-24h，形成红色表示是阳性反响；B、尿素反响 接种后在恒温培育箱36±1℃，培育2-24h，发现颜色变红表示是阳性反响； 沙门氏菌生化实验判定结果 4.6血清学实验 在干净的培育皿上，用灭菌好的接种环沾取两环AFO多价血清，取适当的菌种制成菌悬液，将玻片轻轻摇动30-60s,察看反响，如菌体相互相凝聚成显然或 . 比较显然小颗粒状物，则以为菌体与AFO多价血清凝固，反之不凝固； 不凝固是以为查验样品中不含沙门氏菌，假如凝固，在干净的波片上加一滴生理盐水，将待试培育物混淆于生理盐水滴内，使成为均一性的浑浊悬菌液。将玻片轻轻摇动30～60s。察看反响，如菌体相互相凝聚成显然或比较显然小颗粒状物，即以为有自凝性，反之无自凝性。有自凝性的菌株可清除；无自凝性的菌株，做以下实验： 1、O抗原检查：用以为无自凝力的纯菌落，用1滴O型血清（比如O4、O5、O16、 O12等）取代生理盐水，对该菌株进行排查，如发生凝聚，判为阳性，比较国标 的附表判断是什么菌种。 2、H抗原检查：假如O抗原不可以确立是何种菌株，依据表用上述相同的方法测试H抗原，如发生凝聚，判为阳性，比较国标的附表判断是什么菌种。 3、Vi抗原检查：若以上还不可