复方磺胺甲恶唑的含量测定.docx

高效液相色谱法测定复方磺胺甲嗯唑片的含量［实验目的］ 1掌握高效液相色谱法测定复方磺胺甲嗯唑片的含量的基本原理 2掌握高效液相色谱仪的操作及注意事项［实验原理］ 结构特点：苯环（紫外吸收）、芳伯胺基（重氮化-偶合反应）、磺酰胺基上的活泼氢有一定酸性，可与碱成盐或与重金属离子反应。分子式：C10H11N3O3S分子质量：253.28。本品为白色结品性粉末。熔点167°C，易溶于稀盐酸；氢氧化钠溶液或氨水，几乎不溶于水。无臭，味微苦。外标法是以待测组分的纯品作为对照品，以供试品中待测组分的峰面积或峰高进行定量分析，本实验采用峰面积进行定量。分别精密量取一定量的对照品和供试品配制成溶液，分别进相同的体积的对照品溶液和供试品溶液，在完全相同的色谱条件下进行色谱分析，测定峰面积。 ［实验仪器、试剂］仪器：75-4型紫外可见分光光度计（上海分析仪器厂），高效液相色谱仪，色谱柱，超声波清洗仪，紫外吸收检测器，无油隔膜真空泵，抽滤装置，电子分析天枰，称量纸，研钵，容量瓶（100ml,50ml,25ml,10ml），漏斗，滤纸，烧杯，玻璃棒，移液枪试剂：复方磺胺甲嗯唑片（山东新华制药股份有限公司，批号0412073），甲氧苄啶，磺胺甲嗯唑，甲醇（色谱纯），水（超纯水），乙腈（色谱纯），三乙胺（色谱纯），醋酸溶液（1-100），［实验步骤］ 1.色谱条件与系统适用性试验： 填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 流动相：水-乙腈-三乙胺（799:200:1）（用醋酸溶液（1^100）调节pH值至5.9±0.1）检测波长：254nm流速：1.0mL/min进样量：20ul 理论塔板数：按甲氧苄啶计算应不低于2000，甲氧苄啶与磺胺甲嗯唑峰之间的分离度应大于5.0。甲氧苄啶峰与磺胺甲嗯唑峰的拖尾因子均不得过2.0。 2.测定法2-1溶液的配制2-1-1对照品储备液的配制：取磺胺甲嗯唑200mg，精密称定，置 50ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，备用。 2-1-2对照品溶液的配制：精密量取上述储备液2ml，置50ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，得浓度约为0.16mg/ml的磺胺甲部唑对照品溶液。 2-1-3供试品溶液的配制：取样品10片，精密称定，得其平均片重，粉碎，精密量取细粉适量（约相当于磺胺甲嗯哩0.16g），置100ml容量瓶中，加适量甲醇溶解并用甲醇稀释至刻度，摇匀，过滤，精密量取续滤液5ml，置50ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度，得供试品溶液。 2-2供试品的含量测定 分别量取上述对照品溶液20ul、供试品溶液20ul分别进样。记录磺胺判部唑的峰面积，按外标法以峰面积计算其磺胺甲部唑在复方磺胺甲部唑中的含量。 ［方法学验证］ 1线性范围 精密量取磺胺甲嗯哩12.5mg，置25ml的容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。分别精密量取上述溶液0.5ml、1.5ml、2.5ml、3.5ml、4.5ml于5个10ml容量瓶中加甲醇稀释至刻度。分别进样10ul。按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积为纵坐标，磺胺甲嗯哩的浓度为横坐标绘制标准曲线，计算回归方程。 2精密度实验 量取上述供试品溶液20ml，每次吸取20ul，连续进样6次，测定峰面积，求得磺胺甲嗯哩峰面积RSD 3准确度试验 取复方磺胺甲嗯哩片20片，粉碎，精密量取已知含量的复方磺胺甲嗯哩粉末5份（每份取的复方磺胺甲嗯哩粉末的量约相当于含磺胺甲嗯哩0.16g），再向每份中加入磺胺甲部唑纯品0.16mg，同置100ml容量瓶中，加适量甲醇溶解并用甲醇稀释至刻度，摇匀，过滤，精密量取续滤液5ml，置50ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度，得其5份溶液。每份进样20ul，测定峰面积。求得磺胺甲嗯哩的平均回收率。 ［实验结果］ 对照品 供试品 磺胺甲嗯哩的浓度（C） 磺胺甲部唑的峰面积（A） C（对）/C（供）=A（对）/A（供） ［注意事项及参考文献］ 1.开机前先将流动相过滤和超声 2过滤时有时会出现流动相漏液。操作时，应先向滤瓶内倒入少量流动相，观察是否漏液并开始过滤，若未漏液，再向滤瓶中添加流动相。 3超声时，瓶外液体的液面应高于瓶内流动相的液面，否则流动相内的气体可能无法排出液体，气体仍然残留在流动相内，以致开机排气时无气泡排出。 4开机排气结束后，应先将流动相流量调小，再关闭排气阀，否则会导致柱压瞬间升高超过压力上限，致使泵停止工作。 5.反相高效液相色谱仪冲洗柱子时，应尽量避免使用纯水流动相冲洗柱子，因为水极性强，会损害色谱柱（反相高效液相色谱仪的色谱柱C18是非极性的），导致柱效下降。 6.冲洗色谱柱时，还可辅助以不同比例的混合流动相冲洗色谱柱，以冲出不同极性的残留物质，但最后还是要用纯有机流动相冲洗色谱柱一段时间。 7在实验过程中会出现压力超过上限或压力偏高（在压力上限