DB42T 972-2014甘薯种质资源离体保存技术规程.docx

ICS 65.020.01 B 05 备案号： DB42 湖 北 省 地 方 标 准 DB42/T 972—2014 甘薯种质资源离体保存技术规程 Technical regulations for in vitro conservation of sweetpotato germplasm （报批稿） (完成时间：2013-09-28) 2014 - 04- 28 发布 2014- 07 - 28 实施 湖北省质量技术监督局 发 布 目 次 前言 II 1 范围 1 2 术语与定义 1 2.1 甘薯种质资源 sweetpotato germplasm 1 2.2 甘薯脱毒试管苗 virus-free tube seedling 1 2.3 离体保存 in vitro conservation 1 3 甘薯种质资源离体保存的流程图 1 4 甘薯种质资源离体保存技术 1 4.1 外植体获取 1 4.2 外植体消毒 1 4.3 茎尖剥取 2 4.4 茎尖培养 2 4.5 病毒检测 2 4.6 继代培养保存 2 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写》给出的规则起草。 本标准由湖北省农业科学院提出并归口。 本标准起草单位：湖北省农业科学院粮食作物研究所、湖北郧府薯业有限公司。 本标准主要起草人： 杨新笋、 王连军、苏文瑾、雷剑、柴沙沙、韩堂伍、焦春海、郭英。 甘薯种质资源离体保存技术规程 1 范围 本标准规定了甘薯种质资源离体保存技术的离体保存的流程图和离体保存技术相关内容。 本标准适用于甘薯种质资源的离体保存。 2 术语与定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 甘薯种质资源 sweetpotato germplasm 携带不同遗传物质的甘薯品种（品系） 的统称， 包括地方品种、选育品种、品系和国外引进材料。 2.2 甘薯脱毒试管苗 virus-free tube seedling 应用茎尖分生组织培养技术获得，经检测确认不带甘薯褪绿矮化病毒 (Sweet potato chlorotic stunt virus ，SPCSV) 和甘薯羽状斑驳病毒 (Sweet potato feathery mottle virus ，SPFMV)。 2.3 离体保存 in vitro conservation 利用组织培养技术对甘薯种质进行低温保存。 3 离体保存的流程图 外植体获取 ─→ 外植体消毒 ─→ 茎尖剥取 ─→ 茎尖分生组织培养 —→ 继代培养保 存。 4 离体保存技术 4.1 外植体获取 选用健康薯块，定植于盆钵中，置于适宜的环境条件中生长，取 3 cm -5 cm 的薯芽为外植体，保湿备 用。 4.2 外植体消毒 去除外植体材料上肉眼可见的小叶，留下 1 cm - 1.5 cm 长的茎尖，用自来水冲洗后在无菌条件下，先 用 70％ 的乙醇溶液浸泡 30s，再用 2% 次氯酸钠溶液浸泡 5 min - 10 min，然后用无菌水漂洗 3 次， 每 次 30s 以上，保湿备用。 4.3 茎尖剥取 将经过表面消毒的外植体置于倒扣的无菌培养皿上，用无菌的镊子和手术刀在双筒体式显微镜下剥离 外层幼叶， 切取 0.5mm 左右的茎尖组织。 4.4 茎尖培养 将剥取的茎尖组织接种在 MS 培养基附加 2 mg/L 6- BA 、3％蔗糖、 0.8%琼脂粉、 pH 值 5.8，置于 28℃±2℃、光强 1500lux～2000lux、光照时间 12h 的条件下培养， 获得试管苗。 4.5 病毒检测 采用酶联免疫技术检测甘薯褪绿矮化病毒 (Sweet potato chlorotic stunt virus，SPCSV) 和甘薯羽状斑驳 病毒 (Sweet potato feathery mottle virus ，SPFMV) ，选留脱毒试管苗。 4.6 继代培养保存 采用单节段繁殖，接种在 MS 培养基附加 5g/L 甘露醇、 3％ 蔗糖、 0.8%琼脂粉、 pH 值 5.8，置于 18℃±2℃、光强 1500lux～2000lux、光照时间 12h 的条件下培养保存。