动物细胞培养技术PPT课件.ppt

第十二章：动物细胞培养技术;动物细胞培养技术;第一节体外培养动物细胞的生物学特征;（二）培养细胞分化状态的改变;二、体外培养细胞的形态;6;悬浮性细胞;（二）细胞帖壁过程;（三）接触抑制和密度抑制;三、培养细胞的增殖能力;;;;;;（二）原代培养与传代培养;;（2）分散细胞培养法;胰蛋白酶作用于与赖氨酸或精氨酸相连接的肽键，除去细胞间粘蛋白及糖蛋白，影响细胞骨架，从而使细胞分离。;2、传代培养;（1）贴壁细胞的消化法传代 （2）悬浮细胞的传代;（三）细胞纯化;（四）细胞的冻存复苏及运输;3.细胞运输 1冷冻储存运输2充液法 1）选生长良好的细胞，待接近或刚连接成片时去掉培养液，充新培养液，液量达到瓶颈部，拧紧螺帽，保留微量空气； 2）妥善包转运送，瓶口用胶带密封，并用棉花等做防震防压处理。 3）到目的地后，倒出大部分培养液，仅保留维持细胞生长所需液量，置于37*c培养，次日传代;二、动物细胞培养的基本方法;六、单细胞分离培养技术主要分为三种，即多孔塑料板克隆细胞法、琼脂培养法和饲养细胞层克隆法;;;;（二）动物细胞大规模培养用生物反应器种类;（三）大规模培养操作方式;;（四）动物细胞工程表达产品应用;;第三节培养细胞常规检查和特性鉴定;;2、细胞分裂指数;3、细胞接种存活率 细胞接种存活率=（贴壁存活细胞数/接种细胞数）x100% 4、细胞周期 （1）放射性核素标记自显影法 在细胞进入增殖期后，可以用川标记的胸腺嘧啶核苷处理30min后，每隔30min取材，直到48h为止。观察和计算细胞分裂相出现的时间、高峰和消失分裂相数，绘制成图进行分析。 （2）流式细胞仪测定法 选择对数生长期细胞，用消化法制成细胞悬液，使细胞成为单个细胞，不能成团。然后根据流式细胞仪的检测步骤进行操作。最后通过计算机分析结果计算出细胞周期。;;;四、细胞系（株）的建立;二、培养细胞的常规检查;（三）培养细胞的污染检测和排除;;;;第四节、细胞同步化;二、诱导同步化;;第五节、器官培养;二、器官培养方法;（三）擦镜纸培养法 擦镜纸具有疏水性，可以漂浮在培养液表面作为培养器官的支持物，同时，培养液可以透过擦镜纸而进???培养器官的内部。需要注意的是，在将植块放于擦镜纸上面时，要尽量小心，以免下沉。 （四）金属格栅器官培养法 （五）琼脂小岛器官培养法 用琼脂制成小岛状的支持物，放在液体培养基中，然后将要培养的器官置于琼脂上面进行培养。琼脂不但具有支持的作用，而且还可以防止培养器官的细胞发生迁移。这种方法可以在培养过程中直接观察植块的生长状况，换液也简便。此外，固相培养基和液相培养基共存，从而可在同一培养体系中加入不同的营养成分，使在同一培养系统中培养不同的器官成为可能。 第十二章：动物细胞培养技术;动物细胞培养技术;第一节体外培养动物细胞的生物学特征;（二）培养细胞分化状态的改变;二、体外培养细胞的形态;6;悬浮性细胞;（二）细胞帖壁过程;（三）接触抑制和密度抑制;三、培养细胞的增殖能力;;;;;;（二）原代培养与传代培养;;（2）分散细胞培养法;胰蛋白酶作用于与赖氨酸或精氨酸相连接的肽键，除去细胞间粘蛋白及糖蛋白，影响细胞骨架，从而使细胞分离。;2、传代培养;（1）贴壁细胞的消化法传代 （2）悬浮细胞的传代;（三）细胞纯化;（四）细胞的冻存复苏及运输;3.细胞运输 1冷冻储存运输2充液法 1）选生长良好的细胞，待接近或刚连接成片时去掉培养液，充新培养液，液量达到瓶颈部，拧紧螺帽，保留微量空气； 2）妥善包转运送，瓶口用胶带密封，并用棉花等做防震防压处理。 3）到目的地后，倒出大部分培养液，仅保留维持细胞生长所需液量，置于37*c培养，次日传代;二、动物细胞培养的基本方法;六、单细胞分离培养技术主要分为三种，即多孔塑料板克隆细胞法、琼脂培养法和饲养细胞层克隆法;;;;（二）动物细胞大规模培养用生物反应器种类;（三）大规模培养操作方式;;（四）动物细胞工程表达产品应用;;第三节培养细胞常规检查和特性鉴定;;2、细胞分裂指数;3、细胞接种存活率 细胞接种存活率=（贴壁存活细胞数/接种细胞数）x100% 4、细胞周期 （1）放射性核素标记自显影法 在细胞进入增殖期后，可以用川标记的胸腺嘧啶核苷处理30min后，每隔30min取材，直到48h为止。观察和计算细胞分裂相出现的时间、高峰和消失分裂相数，绘制成图进行分析。 （2）流式细胞仪测定法 选择对数生长期细胞，用消化法制成细胞悬液，使细胞成为单个细胞，不能成团。然后根据流式细胞仪的检测步骤进行操作。最后通过计算机分析结果计算出细胞周期。;;;四、细胞系（株）的建立;二、培养细胞的常规检查;（三）培养细胞的污染检测和排除;;;;第四节、细胞同步化;二、诱导同步化;;第五节、器官培养;二、器官培养方法;（三）擦镜纸培