2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类对照提取物在白及质量控制中的应用研究.docx

? ? 2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类对照提取物在白及质量控制中的应用研究 ? ? 刘 刚，刘金梅，穆开朗，刘育辰，孙庆文，张永萍 2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类对照提取物在白及质量控制中的应用研究 刘 刚，刘金梅#，穆开朗，刘育辰*，孙庆文，张永萍 贵州中医药大学，贵州 贵阳 550025 建立以2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类对照提取物为对照的白及质量控制方法。采用ZORBAX Eclipse Plus C18（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）色谱柱，流动相为0.05%磷酸水溶液（A）- 乙腈（B），梯度洗脱，柱温35 ℃，体积流量0.15 mL/min，进样体积为2 μL，检测波长为220 nm。分别采用对照品法和对照提取物法测定17批白及饮片中1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯-2-葡萄糖苷（2--葡萄糖基白及苷）、1-[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯（手参苷Ⅰ）、1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸-2-(6--乙酰基) 葡萄糖苷（手参苷Ⅲ）、1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯（白及苷）4个成分的含量，并进行比较。2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类对照提取物中2--葡萄糖基白及苷、手参苷Ⅰ、手参苷Ⅲ、白及苷线性关系良好（≥0.999 9），进样精密度RSD值在0.001%～0.58%，重复性RSD值在0.27%～0.53%，4种成分的加样回收率在98.42%～101.53%，样品溶液在24 h内各成分稳定性良好。两种方法测定结果进行检验，＞0.05，说明两种方法无显著差异，两种检测方法结果具备一致性。验证了2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类对照提取物可代替单体对照品的可行性，可应用于白及及其制剂的质量控制研究。 白及；2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类；对照提取物；质量控制；2--葡萄糖基白及苷；手参苷Ⅰ；手参苷Ⅲ；白及苷 白及为兰科植物白及(Thunb.) Reiehb. f.的干燥块茎，具有收敛止血、消肿生肌的功效[1]。白及中主要含有白及多糖、2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类、联苄类、菲类、黄酮类、苯丙素类、甾体、三萜等成分[2-6]。近年来许多学者对白及质量控制技术方法进行了研究和探索，从单一指标成分定量测定到多指标成分定量测定结合指纹图谱等[7-9]这些研究成果无疑对白及质量评价和控制水平的提高起到了极大的促进作用，但是仍存在的对照品价格贵、不易得、检测成本高，质控指标与药效关联性不强等问题。 《中国药典》2020年版首次以1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯（白及苷）作为单一指标成分进行定量测定，白及苷为2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类化合物，除白及多糖成分外，此类化合物是白及中主要成分[10-12]，除了白及苷，此类成分中其他几个化合物均难以获得。由于中药成分的多样性，仅以单一成分作为检测指标的检测方法，其专属性远低于多指标检测方法，且也无法体现中药整体性概念。而使用对照提取物作为标准物质，相对于难获得、高成本的单体对照品而言，其制备工艺更简便易行。同时，使用对照提取物代替单一对照品可以实现同时测定多个成分的含量，更能反映中药的整体质量[13-15]。 对照提取物系指经特定提取工艺制备的含有多种主要有效成分或指标性成分，用于中药材（饮片）、提取物、中成药等鉴别或含量测定用的国家药品标准物质[16]。同时，规定对照提取物选取应从基原明确的中药材（饮片）或其他动植物中提取获得[17]。对照提取物相比单一对照品制备方法更简单、检测成本更低、适用性更好[18]。 在前期的研究中，本课题组优选了2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类白及对照提取物的制备工艺，对照提取物中1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯-2-葡萄糖苷（2--葡萄糖基白及苷）、1-[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯（手参苷Ⅰ）、1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸-2-(6--乙酰基) 葡萄糖苷（手参苷Ⅲ）、1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯（白及苷）4个成分总含量超过70%，符合对照提取物的要求[19]，本研究以2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类对照提取物为对照，应用于白及药材的质量控制，试图构建高效、易行、科学的白及质量评价新模式。 1 仪器与试药 1.1 仪器 超高效液相色谱仪（Agilent 1290 infinity II，美国Agilent公司）；FA2204B型电子天平（上海天美天平仪器有限公司）；AG135型电子天平（瑞士Mettler-Toledo公司）。 1.2 试药 乙腈为色谱纯（美国TEDIA公司）；其他试剂均为分析纯；纯净水（贵阳娃哈哈食品有限公司）；硅胶GF254