组织和细胞培养技术.ppt

微量离心管（Eppendorf管） 四、培养器皿的清洗与消毒 1.玻璃器皿的清洗 1.1 浸泡 1.2 刷洗 1.3 浸酸 1.4 冲洗 成分 弱清洁液 次强酸清洁液 强酸清洁液 重铬酸钾(g) 100 120 63 硫酸(ml) 100 200 1000 蒸馏水(ml) 1000 1000 200 2.橡胶制品的清洗 新购置的橡胶制品（胶塞，胶管、橡皮乳头）的洗涤方法： 0.5mol/L NaOH煮沸15分钟 0.5mol/L HCl煮沸15分钟 流水冲洗 自来水煮沸2次 蒸馏水煮沸20分钟 50℃烤干备用 用过的胶塞： 基本同玻璃器皿，但洗刷的重点是使用面，应逐个刷洗，单蒸、双蒸冲洗后，用双蒸煮沸30分钟。 3.塑料制品的清洗 塑料制品的特点：质地软、易出现划痕；耐腐蚀能力强、但不耐热。 清洗程序：流水冲洗，浸泡，纱布或棉签刷洗，冲洗，晾干，浸于清洁液中15min，冲洗，凉干备用。 4.包装 常用的包装材料：牛皮纸、硫酸纸、棉布、铝饭盒、玻璃或金属的消毒筒。 4.消毒和灭菌4.1 紫外线消毒紫外线是一种低能量的电磁辐射，革兰阴性菌最为敏感，其次是革兰阳性菌，再次为芽孢。直接作用机制：破坏微生物的核酸及蛋白质等而使其灭活间接作用机制：紫外线照射产生的臭氧杀死微生物4.2 电离辐射灭菌：是以放射性核素产生的γ射线或电子加速器产生的加速离子辐照物品以杀死微生物的方法。 4.3 高温湿热灭菌： 压力蒸汽灭菌，造成蛋白质变性凝固使微生物死 亡。玻璃类灭菌（121℃，30分钟）；橡胶、塑 料类（115℃，15分钟）消毒好的物品，应立即 放到60℃-70℃烤箱内烘干备用 煮沸消毒也是常用的方法 4.4 高温干热灭菌：电烤箱的物品加热到160℃ 以上，并保持90-120分钟，达到灭菌目的。 灼烧也是干热灭菌的方法之一。 4.5 过滤除菌：微孔膜过滤 4.6 甲醛：其水溶液和气体对各种细菌、芽孢及真菌等微生物均有杀灭作用，用于无菌室的空气和物体表面的灭菌。(1)多聚甲醛加热法：10-20g/m2 ,作用12-24h(2)甲醛水溶液蒸发法:25ml/m2 ，时间同(3)氧化法:福尔马林40ml/m2,高锰酸钾30g/m2 (漂白粉20g/m2)。 4.7 环氧乙烷：消毒塑料用品、不耐高热高压以及不能受潮湿的物品，环氧乙烷易燃易爆，且气体有毒，不可用于空气消毒。 4.8 乙醇：对其他灭菌剂有增效或协同作用，如：戊二醛、碘伏、氯已定（洗必泰）。消毒浓度为70%-75%的乙醇水溶液。4.9 氯乙定：主要用于皮肤及创面消毒。用0.02%洗必泰和0.5%洗必泰乙醇溶液(70%乙醇配制)消毒手及动物创面的洗涤消毒。4.10 戊二醛:现将戊二醛原液稀释成2%水溶液，再加入0.3%NaHCO3,将溶液调至Ph7.5-8.5，另加入0.5%亚硝酸钠可防锈和增效。 4.11 新洁而灭：0.1%水溶液可对器械、皮肤、操作表面进行擦拭和浸泡消毒。4.12 碘伏和碘酊：医用碘伏是聚烯吡咯烷酮-碘，可用于手消毒和手术野的皮肤消毒。也可将1%碘伏用于地面、台面及物品表面等的擦拭或喷雾消毒。碘酊又名碘酒，主要用于皮肤消毒，皮肤经碘酒涂抹2-3次后，须用70%乙醇脱碘。 第三章 组织培养基 一、培养基的基本要求 1.营养成分：氨基酸、单糖、维生素 、无机离子和微量元素 2.促生长因子及激素：各种激素、生长调节因子对于维持细胞的功能、保持细胞的状态（分化的或未分化的）具有十分重要的作用。 3.渗透压：人血浆渗透压约290mOsm/kg，是培养人体细胞的理想渗透压。大多数哺乳类动物细胞，渗透压在260-320 mOsm/kg的范围内都适宜。 4.pH:适宜pH为7.2-7.4，合成培养基中使用了NaHCO3-CO2缓冲系统，并采用开放式培养的方式，使细胞代谢产生的CO2及时逸出培养皿，再通过稳定调节温箱中CO2气体的浓度（5%），使之与培养基中的NaHCO3处于平衡状态。NaHCO3+H2O Na++HO-+H2O+CO25.无毒、无污染：培养基应达到无化学物质污染、无微生物污染、无其他对细胞产生损伤作用的生物活性物质污染。 二、天然培养基 1.血清 1.1 血清的种类：主要是牛血清，分为：小牛血清（出生10-30天）、新生牛血清（出生24小时之内）和胎牛血清（剖腹产的胎牛） 1.2 血清的主要成分及主要作用：血清是由血浆去除纤维蛋白而形成，血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、