核医学放射性标记化合物.ppt

本法优点： 效率高，重复性好，试剂价格低易得，是常用碘标法。（注意标记物是混合物） 分离方法：透析或凝胶过滤。 * 第二十九页，共五十二页，2022年，8月28日 CH-T标记实验应注意的问题 ①氯胺-T临时配制； ②氯胺-T用量要适宜，过大免疫活性和生物活性低，反之，标记率低； ③加入氯胺-T后尽快混匀； ④反应时间：0-24℃，1分钟左右； ⑤反应终止：偏重亚硫酸钠，约1.5倍CH-T量； ⑥反应体积小，使微量蛋白质保持高浓度，保证碘化效应。 ⑦PH值，根据不同的蛋白决定（7.3-7.8）。 * 第三十页，共五十二页，2022年，8月28日 2、乳过氧化物酶法： 乳过氧化物酶有促进微量过氧化氢对125I-的氧化作用生成125I2，并标记在蛋白质酪氨酸分子上。本法应该注意：反应条件温和，H2O2只需要极低浓度（1×10-3 mM）因而通常能保持标记化合物原有的生物活性和免疫活性。 缺点：标记率低，20-40% * 第三十一页，共五十二页，2022年，8月28日 3、联接标记法： 先用Na125I和氧化剂（CH-T）碘化 酰化剂3-(对-羟基苯)丙酸-N琥珀亚胺酯（Bolton-Hunter试剂或BH） 再与蛋白质分子中的游离氨基酸相结合引入蛋白质中。 * 第三十二页，共五十二页，2022年，8月28日 优点： ①避免蛋白质与氧化剂的接触； ②避免蛋白质与放射性碘的直接接触； ③防止碘源中有害物质对蛋白质的损伤； ④适用于标记缺乏酪氨酸的蛋白质或酪氨酸在活性中心，引入碘原子后会引起蛋白质的失活。 缺点：操作麻烦，二步反应，引入异物，放射性碘利用率受一定影响。 * 第三十三页，共五十二页，2022年，8月28日 4、固相氧化法（ Iodogen） Iodogen 在一定PH及温度范围内使用，在水中溶解度极小。 将Iodogen的二氯甲烷溶液放入反应管中或涂在小破片上，微微加热，使溶剂挥发后，反应管下部或小玻片上就形成Iodogen薄膜，蛋白质碘标记反应就在反应管中进行，或将小波片“悬挂”入加有Na125I的细胞培养液中，可使细胞表面的蛋白碘化。 优点：碘化效率高，对标记物的损伤程度小。 * 第三十四页，共五十二页，2022年，8月28日 5、核酸碘标记： 即探针，原理同上。 举例：DNA的125I标记技术。操作程序 ①DNA常规提取纯化； ②DNA加热（70℃），分为单股DNA； ③用TLCL3将Na125I氧化产生125I2 ④调PH4.7，125I将取代嘧啶环上第5位的碳原子，形成共价结合的DNA单链。 ⑤降温，恢复双股DNA得125I-DNA； ⑥纯化。 第三十五页，共五十二页，2022年，8月28日 6、32P、35P、33P的标记： 这三核素主要用于标记核苷酸，而标记蛋白常用125I、3H。 * 第三十六页，共五十二页，2022年，8月28日 五、放射性标记化合物的纯化与鉴定 （一）标记做完后需做三件事： 1、标记率测定 2、分离纯化； 3、产品质量鉴定； （二）标记率：放射性核素标到标记物的量占投料总放射性的百分数。 * 第三十七页，共五十二页，2022年，8月28日 第一页，共五十二页，2022年，8月28日 放射性核素标记化合物是化合物分子中某一原子或某些原子被放射性核素原子所取代的化合物，是进行机体微量物质测定和示踪研究重要的分析试剂和示踪剂。 要求：引入放射性核素后应该保持化合物原有的理化、生物学性质不变。 定义 第二页，共五十二页，2022年，8月28日 标记物举例 ①3H-TdR，研究细胞增殖； ②药物、蛋白、核酸的标记示踪研究； ③细胞标记：如RBC标记，将分离的RBC加入Na2 51CrO4约1850-2775KBq，室温放置30分钟，以生理盐水洗涤，就得51Cr-RBC，可测血容量或研究RBC寿命。 第三页，共五十二页，2022年，8月28日 一、放射性核素来源 主要通过人工核反应，从反应堆和加速器中产生，90%的放射性核素用于医学应用，放射性核素必须经过必要的分离纯化、等放射化学处理，经鉴定放射性核纯度，并测定比活度，才供使用。 * 第四页，共五十二页，2022年，8月28日 二、标记化合物的概念： 1、对放射性核素的选择： ①半衰期； ②射线类型和能量； ③价格、防护； ④标记难易程度； ⑤同位素标记和非同位素标记。 * 第五页，共五十二页，2022年，8月28日 两个概念 同位素标记： 选用化合物中原有元素的同位素标记：如14C、3H标记。 非同位素