限制性内切酶HindIII说明书.docx

Hind III A G C TT C G A A G C T T C G A T A 运输温度：-20℃ 保存温度：-20℃Takara Code 运输温度：-20℃ 保存温度：-20℃ 附带试剂： 10×M Buffer 500 μl 10×Loading Buffer 500 μl 纯 度： Overdigestion Tes：t ≥15 Units Ligation-Recutting Te：st Ligation Ef：fi1.00%,Recutting Eff：i.100% 3） pKF3 Cloning Test：＜2% ●酶贮存液： 10 mM Tris-HCl, pH7.5 400 mM KCl 0.1 mM EDTA 1 mM DTT 0.01 % BSA 50 % Glycerol ●起 源：Escherichia coclairrying the plasmid encodiHnignd Ⅲ gene. ●一般反应体系： Hind Ⅲ 1 μl 10×M Buffer 2 μl DNA ≤1 μg 灭菌水 up to 20 μl ●反应温度：37 ℃ ●反应时间： 在上述 20 μl的反应体系中，37 ℃反应 5 分钟可以完全切断λDNA ， 满足各种实验需求。针对特殊酶切底物DNA ，如果得不到良好的酶切效果时，可以将反应时间延长至1 小时。 ●活性确认： 在 50 μl反应液中，37 ℃温度下反应 1 小时，将 1 μg 的λDNA 完全 分解的酶量定义为 1 个活性单位(U)。 ●纯度检测： Overdigestion Test：在 1 μg DNA 中加入过量的该限制酶， 进行长时间（24 小时）酶切反应，然后进行琼脂糖电泳，确认切出的DNA 片段的电泳谱带不发生变化。 Ligation-Recutting Te：st在经过 10 倍量该酶切出的DNA 片段中，加入 T4 DNA Ligase ，使其连接，然后再使用该酶进行切断反应，判断Ligation-Recuttin效g 率。 pKF3 Enforcement Cloning Test ：使用 10 倍量的该酶，将Enforcement Cloning Vector pKF3 DNA 切开，然后再进行连接后，转化至 TH2 感受态细胞中，判断该酶切位点受到影响的重组体所占的比率。 ●在各种Universal Buffe中r 的相对活性： L M H K T（+BSA ） 相对活性(%) (60) 100 ＜20 200 (100) ●各种 DNA 的切断数： λ Ad2 SV φX pBR pUC pUC M13 Col 40 174 322 19 119 mp18 E1 7 12 6 0 1 1 1 1 0 Star活性： Mn 2+存在条件下，识别序列会发生变化。 Basal Buffer组成： 10 mM Tris-HCl, pH7.5 7 mM MgCl 2 60 mM NaCl Universal Buffe组r 成（-20℃保存）： 1.10 × 1L00 mM Tris-HCl,pH7.54.10 × K 200 mMTris-HCl,pH8.5 100 mM MgCl 2 100 mM MgCl 2 10 mM Dithiothreitol 10 mM Dithiothreitol 2.10 × M 100 mMTris-HCl,pH7.5 1,000 mM KCl 100 mM MgCl 2 5.10 × T 330 mMTris-Ac,pH7.9 10 mM Dithiothreitol(BSA 100 mM Mg-Ac 500 mM NaCl －Free) 5 mM Dithiothreitol 3.10 × H 500 mMTris-HCl,pH7.5 660 mM K-Ac 100 mM MgCl 2 6. 0.1% BSA 10 mM Dithiothreitol7. 0.1%Triton X-100 1,000 mM NaCl 10×Loading Buffe组r 成 （开封后室温保存） 0.9% SDS 50% Glycerol 0.05% Bromophenol Blue 使用时添加反应液量的1/10，即可停止反应，进行电泳。-20℃保存 时，会出现 SDS 沉淀，请于温水浴中溶解后使用。在室温下保存时， SDS 有时也会出现沉淀，此时同样请在温水浴中溶解后使用。 V2011.12