透析袋处理及透析操作.docx

PAGE PAGE 3 透析袋处理及透析操作 透析只需要使用专用的半透膜即可完成。通常是将半透膜制成袋状，将生物大分子样品溶液置入袋内，将此透析袋浸入水或缓冲液中，样品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋内，而盐和小分子物质不断扩散透析到袋外，直到袋内外两边的浓度达到平衡为止。保留在透析袋内未透析出的样品溶液称为保留液，袋（膜）外的溶液称为渗出液或透析液。透析的动力是扩散压，扩散压是由横跨膜两边的浓度梯度形成的。透析的速度反比于膜的厚度，正比于欲透析的小分子溶质在膜内外两边的浓度梯度，还正比于膜的面积和温度，通常是 4℃透析，升高温度可加快透析速度。 透析膜可用动物膜和玻璃纸等，但用的最多的还是用纤维素制成的透析膜， 目前常用的是美国 Union Carbide （联合碳化物公司）和美国光谱医学公司生产的各种尺寸的透析管，截留分子量 MwCO（即留在透析袋内的生物大分子的最小分子量，缩写为 MwCO）通常为 1 万左右。商品透析袋制成管状，其扁平宽度为 23 mm～50 mm 不等。为防干裂，出厂时都用 10％的甘油处理过， 并含有极微量的硫化物(0.1%)、重金属和一些具有紫外吸收的杂质，它们对蛋白质和其它生物活性物质有害，用前必须除去。 透析袋的处理：可先用 50％乙醇煮沸 1 小时，再依次用 50％乙醇、0.01 mol/L 碳酸氢钠和 0.001 mol/L EDTA溶液洗涤，最后用蒸馏水冲洗即可使用。实验证明，50％乙醇处理对除去具有紫外吸收的杂质特别有效。（也可先在大体积的 2%(W/V)碳酸氢钠和 1mmol/L EDTA(pH 8.0)中将透析袋煮沸 10 分钟，用蒸馏水彻底清洗后，再放在 1mmol/L EDTA(pH 8.0)中将之煮沸 10 分钟。）使用后的透析袋洗净后可存于4℃蒸馏水中，确保透析袋始终浸没在溶液内。若长时间不用，可加少量NaN2，以防长菌。从此时起取用透析袋必须戴手套。洗净凉干的透析袋弯折时易裂口，用时必须仔细检查，不漏时方可重复使用。 新透析袋如不作如上的特殊处理，则可用沸水煮五至十分钟，再用蒸馏水洗 净，即可使用。使用时，一端用橡皮筋或线绳扎紧，也可以使用特制的透析袋夹夹紧，由另一端灌满水，用手指稍加压，检查不漏，方可装入待透析液，通常要留三分之一至一半的空间，以防透析过程中，透析的小分子量较大时，袋外的水和缓冲液过量进入袋内将袋涨破。含盐量很高的蛋白质溶液透析过夜时，体积增加 50％是正常的。为了加快透析速度，除多次更换透析液外，还可使用磁子搅拌。透析的容器要大一些，可以使用大烧杯、大量筒和塑料桶。小量体积溶液的透析，可在袋内放一截两头烧园的玻璃棒或两端封口的玻璃管，以使透析袋沉入液面以下。 检查透析效果的方法是：用 1％ BaCl2 检查(NH4)2SO4，用 1％ AgNO3 检查 NaCl、KCl 等。 透析袋预处理方法 将透析管剪成适当长度，10-20cm 的小段，即形成透析袋 在大体积2％（m/V）碳酸氢钠和1mmol/LEDTA（PH8.0）中将透析袋煮沸 10min 将透析袋用蒸馏水彻底漂洗 将透析袋置 1mmol/LEDTA（PH8.0）中煮沸 10min 将透析袋冷却，存放于 4 摄氏度，应确保透析袋始终浸没在液体中。 重要：从此步起用透析袋时一定要带手套操作 在使用前要用蒸馏水将透析袋里外加以清洗。 用过的透析袋保存前需要怎么处理？ 用生理盐水浸泡以去掉蛋白，并用蒸馏水清洗干净，然后置 50％乙醇中保存即可； 用完以后,要彻底洗干净,透析袋也可以保存在 0.1%叠氮钠（可防止微生物生长）里； 0.05%-0.1%叠氮钠，或者 1mM EDTA，或者 50％甘油中 4 度保存，公司的人建议前两种保存比较好！