临床免疫学：移植免疫与配型完整版.pptVIP

临床意义 HLA配型是移植成功与否最基础最关键的一步，保证供受体间上述分型相同，防止移植排斥反应 HLA位点和碱基顺序： 位点不同——急性排斥 位点同、碱基顺序不同——慢性排斥 六、PRA的概念及检测方法 ※概念：是指群体反应性抗HLA各种抗原的抗体，通常为IgG；是各种组织器官移植术前筛选致敏受者的重要指标，与移植排斥反应和存活率密切相关。 如果患者在输血或器官移植中曾经接触过他人HLA，则会产生较强的抗性，不利于器官移植配型。 群体反应性抗体panel reactive antibody, PRA PRA与移植 PRA阳性也与心脏移植、肺移植、肝移植中的排斥反应相关，并且往往出现在排斥症状发生之前。 受者术前、术后PRA分析可以让临床医生及时了解移植后的免疫状态和具有排斥反应预警作用。 2000年美国联邦立法将PRA列入器官移植规范技术，2004年PRA被例入中国的器官移植技术标准之一。 抗体特异性 HLA-I类465例（43.5%） HLA-II类268例(25.1%) HLA-I -II333例(31.4%)。 南方医院 肖露露 1066例PRA阳性受者的HLA特异性分析 结果和讨论 HLA-I类抗体比例为75%，最常见的为抗HLA-A2、A24、A19和抗HLA-B40、B15、B22。 II类抗体57％；最常见的为抗HLA-DR5，DR4和DR7。 PRA阳性率有显著地性别差异，女性受者因既往的妊娠经历导致产生HLA抗体的几率高。 某个特异性HLA抗体的产生的几率主要受２种因素的影响： （一）该抗原在人群中分布频率 （二）该抗原的等位基因数目 唯一有效的检测器官移植受者免疫状态的方法是体液免疫检测（而不是细胞免疫检测），即通过PRA检查患者HLA抗体的存在。 移植前PRA阳性，代表受者已经被致敏，其移植物的存活率明显低于移植前未被致敏得受者； 移植后PRA阳性，则有2种可能：即排斥预兆，或是术中输血致敏；前者直接介导移植物被排斥，而后者则对移植物无损害。 Allo-antibody detection with purified antigen 抗原 ELISA FLOW Luminex Ag Ag Ag Ag Colored Beads Ag Ag Ag Ag Ag Ag Ag Ag FITC-Anti-Human IgG Anti-Ag (纯化抗原的抗体检测) ELISA：包被HLA抗原 LABScan? 100 Luminex仪器 直径 5.6 ?M，液态反应体系中呈悬浮状态 表面带有大量的活性基团，可与核酸探针，抗体等方便地偶联 MicroPlex 微球 Microspheres (Beads) Luminex技术的原理 Microspheres (Beads) 微球在生产过程中带上红色和红外两种染料 两种染料的不同配比赋予了微球不同的光谱学指纹既特有的荧光激发光谱. Luminex技术的原理 * Luminex系统可用于各种免疫学实验, 酶学实验和复杂的基因分析. 实验的反应物, 如:抗体、寡核甘酸等被包被到这种特殊的荧光磁珠表面. Luminex技术的原理 用捕捉物(一抗)包被微球 加进样品(抗原) 加进生物素接合(Biotinylated)的二抗 加进报告用的荧光报告基团 Assay Luminex技术的原理 红激光分辨微球本身的光谱学指纹 绿激光检测荧光报告基团 Analysis Luminex技术的原理 Luminex技术的特点 高通量：1次检测，仅需10μl样本，最多可达100个指标 高速度：最快可达10000测试/小时 低成本：流式荧光技术联检的试剂用量少，能有效降低 临床应用的成本 灵敏度高：包被有大量的抗原、抗体或核酸分子，反应 充分、产生信号强，通过激光激发荧光检测 重复性好：每个指标有5000个反应单元，分析100次取均值 PE-anti-IgG Alloantibody PE-第二抗体结合物检测HLA抗体 工作原理 LABScreen 7μl 血清+14ulPBS(1x) 2μl 微球 室温下避光孵育30分钟 洗涤3次 加入PE-标记第二抗体 室温下避光孵育30分钟 洗涤2次 LabScan? 100流式分析仪读取结果 操作流程 LABScreen 特点与优势 灵敏度高 单管，单次检测 - 可同时检测I 类II类PRA 特异性强，可达到高分辨水平 自动读取数据，进行分析。 操作简便、快速。 高通量处理样品。