食品微生物检验常用的试剂及其配制—染料及染色液的配制.pptx

常用染色液的配制目录/Contents1常用染色液的配制染色液01常用染色液的配制1. 吕氏碱性美蓝染色液美蓝0.3g95％乙醇30mL0.01％氢氧化钾溶液100mL将美蓝溶解于乙醇中，然后于氢氧化钾溶液混合。染色时，先将涂片在火焰上固定，待冷却后滴加染液，染1min~3min，水洗，待干，镜检。01常用染色液的配制2. 奥尔特氏荚膜染色液（1）成分沙黄 3g蒸馏水 100mL用乳钵研磨溶解。01常用染色液的配制（2）染色法将涂片在火焰上固定，滴加染色液，并加热至产生蒸汽后，继续染3min，水洗，待干，镜检。（3）结果炭疽芽孢杆菌菌体呈赤褐色，荚膜呈黄色。01常用染色液的配制3. 瑞氏染色液（2015年新法）（1）成分瑞氏色素0.1g甲醇60mL用乳钵研磨溶解01常用染色液的配制3. 瑞氏染色液（2015年新法）（2）染色法①待涂片自然干燥后，滴加染色液，固定1min。②加入等量磷酸盐缓冲液，轻轻晃动玻片或采用其他方式混合，使磷酸盐缓冲液与瑞氏染液混匀静置；③再用蒸馏水从一端轻轻冲洗，待干燥后，镜检。01常用染色液的配制4. 革兰氏染色法（1）染色液①结晶紫染色液结晶紫1g95％乙醇20mL1％草酸铵水溶液80mL将结晶紫溶解于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。01常用染色液的配制②革兰氏碘液碘1g碘化钾2g蒸馏水300mL将碘与碘化钾先进行混合，加入蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，在加蒸馏水至300mL。01常用染色液的配制③沙黄复染法染色液沙黄0.25g95％乙醇10mL蒸馏水90mL将沙黄溶解于乙醇中，然后用蒸馏水稀释。01常用染色液的配制（2）染色法①将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染色液，染1min，水洗；②滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗；③滴加95％乙醇脱色，约30s；或将乙醇滴满整个涂片，立即倾去，再用乙醇滴满整个涂片，脱色10s；④水洗，滴加复染液，复染1min，水洗，待干，镜检。（3）结果革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。01常用染色液的配制5. 耐酸性染色法（1）染色液①石炭酸品红染色液碱性品红0.3g95％乙醇10mL5％苯酚水溶液90mL将品红溶解于乙醇中，然后与苯酚溶液混合。01常用染色液的配制②3％盐酸-乙醇浓烟酸3mL95％乙醇97mL③复染液吕氏碱性美蓝染色液01常用染色液的配制（2）染色法①将涂片在火焰上固定，滴加石炭酸品红染色液，徐徐加热至有蒸汽出现，但切不可使沸腾。染液因蒸发减少时，应随时添加。染5min，倾去染液，水洗；② 滴加盐酸-乙醇脱色，直至无红色脱落为止，（所需时间视涂片厚薄而定，一般为1min~3min），水洗；③ 加吕氏碱性美蓝染色液，复染30min，水洗，待干，镜检。（3）结果耐酸性细菌呈红色，其他细菌、细胞等物质呈蓝色。01常用染色液的配制6. 柯氏染色法（1）染色液成分0.5％沙黄液0.5％孔雀绿液（2）染色法①将涂片在火焰上固定，滴加0.5％沙黄液，并加热至出现气泡，约2min~3min，水洗；②滴加0.5％孔雀绿液，复染40s~50s，水洗，待干，镜检。（3）结果布氏杆菌呈红色，其他细菌及细胞呈绿色。01常用染色液的配制7. 鞭毛染色法（1）染色液的配制①甲液称丹宁酸5g、氯化高铁（FeCl3）1.5g，溶于100mL蒸馏水中，待溶解后加入1％的氢氧化纳溶液1mL和15％的甲醛溶液2mL。01常用染色液的配制7. 鞭毛染色法②乙液称2g硝酸银溶于100mL蒸馏水中。在90mL乙液中滴加浓氢氧化铵溶液，到出现沉淀后，继续滴加使其变为澄清，然后用其余10mL乙液小心滴加至澄清液中，至出现轻微雾状为止（此为关键性操作，应特别小心）。滴加氢氧化铵和用剩余乙液回滴时，要边滴边充分摇荡，染液当天配，当天使用，2d~3d后基本无效。01常用染色液的配制（2）染色法在风干的载玻片上滴加甲液，4min~6min后，用蒸馏水轻轻冲净，再加乙液，缓缓加热至冒汽，维持约半分钟（加热时注意勿出现干燥面），在菌体多的部位可呈深褐色到黑色，停止加热，用水冲净，干后镜检。菌体及鞭毛为深褐色到黑色。 01常用染色液的配制8．考马斯亮蓝R-250染色液考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度,是利用蛋白质―染料结合的原理,定量的测定微量蛋白浓度的快速、灵敏的方法。01常用染色液的配制8．考马斯亮蓝R-250染色液考马斯亮蓝R-250染色液的配置方法（1L的量）：（1）称取1g 考马斯亮蓝R-250，置于1L 烧杯中。（2）量取250mL 的异丙醇加入上述烧杯中，搅拌溶解。（3）加入100mL 的冰乙醋酸，均匀搅拌。（4）加入650mL 的去离子水，均匀搅拌。（5） 用滤纸出去颗粒物质后，室温保存。染色与细菌的形态观察技术目录/Contents1染色的基本程序染色染色的基本程序第一节 染色与细菌的形态观