《药物仪器分析技术》课件 第七章 高效液相色谱法.pptx

高效液相色谱法 第七章 目录CONTENTS01基础知识02高效液相色谱仪组成与部件03基本操作及日常维护04实用分析技术05实训十二 阿司匹林肠溶片的含量测定06实训十三 维生素K1注射液的含量测定 案例导入 近些年，越来越多的药物研究人员发现，在生产制作药品时经常会不小心添加一些杂质，虽不会降低其药效，但却直接影响了消费者的权益，对此，相关部门及人员应当注重药物中杂质的检测工作。而高效液相色谱仪对药物杂质检测有重大现实意义。高效液相色谱仪的快速发展为药品质量提供了有效的保证。 基础知识第一节01 1.能说出高效液相色谱法的原理和应用。2.能说出高效液相色谱法的优点。3.能说出化学键合相色谱、反相离子对色谱分离原理以及高效液相色谱定性和定量方法。 4.能说出常用高效液相色谱的分类。学习目标 高效液相色谱法是20世纪60年代末期，在经典液相色谱法基础上，引入气相色谱的理论和实验技术，以高压输送流动相，采用高效固定相和高灵敏度检测器发展而成的现代液相色谱分析方法。HPLC采用颗粒极细（＜10μm）的高效填料以高压匀浆装柱，柱效大大高于经典液相色谱法，且安装好的柱可反复使用；HPLC采用高压泵输送流动相，分析速度快，同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物连续检测，易于实现自动化，且所需试样少，微升数量级的试样足以进行全分析。概述011 . 高效液相色谱法的概念 概述01(1) 高效(2) 高速(3) 高灵敏度(4) 适用范围广(5) 流动相选择范围宽1 . 高效液相色谱法的优点 高效液相色谱法的分类与经典液相色谱法的分类基本相同。按固定相的聚集状态可分为液-固色谱法（LSC）和液-液色谱法（LLC）两大类；按分离机制的不同可分为吸附色谱法、分配色谱法、离子交换色谱法、分子排阻色谱法、亲合色谱法、离子色谱法、胶束色谱法、手性色谱法、电色谱法等。本章依据药品食品分析检验的实际情况，着重介绍最常用的化学键合相色谱法和反相离子对色谱法。常用高效液相色谱分类及原理02分类 1、化学键合色谱法化学键合相色谱法（简称键合相色谱法，BPC) 由液-液分配色谱法发展而来。液-液分配色谱法的固定相是将固定液涂渍在载体表面构成，其缺点是固定液容易被流动相渐渐溶解而流失，所以流动相的流速不能高，也不能采用梯度洗脱，柱的重复性、稳定性不好。为了解决这些问题而发展了化学键合相，它是将固定液利用化学反应键合到载体表面上，使其形成均一、牢固的单分子薄层而构成的固定相，简称键合相，是目前使用最广泛的一种固定相。采用化学键合相的液相色谱称为化学键合相色谱。常用高效液相色谱分类及原理02 键合了可交换离子基团的固定相，包括可交换阴离子的基团（如氨基、季铵盐等）和可交换阳离子的基团（如磺酸基等）。 键合后带氨基、氰基、醚基、醇基等极性基团的固定相。 极性键合相 非极性键合相用不同链长的烷基，如辛烷基、十八烷基、甲基、苯基等键合得到的固定相。离子型键合相 常用高效液相色谱分类及原理02化学键合类型 反相键合相色谱法的固定相极性比流动相极性弱， 固定相常采用非极性键合相，反相键合相色谱法的分离机制十分复杂， 目前说法不一，现被人们接受较多的是其中的 “疏溶剂作用理论”。 反相键合相色谱法正相键合相色谱法正相键合相色谱法的固定相极性比流动相极性强，固定相采用极性键合相，其分离原理类似于液液分配色谱，即把有机键合层看作一层液膜，组分在两相间进行分配，极性强的组分分配系数（k）大，保留时间 （tR）长，后出色谱柱。常用高效液相色谱分类及原理02分离原理 2、反相离子对色谱法反相离子对色谱法 (RPIC) 是离子对萃取技术与反相色谱法相结合的产物 ，是分析有机酸 、碱的极好方法。常用高效液相色谱分类及原理02 反相离子对色谱法是在反相色谱法中，将一种或多种与被测离子电荷相反的离子（称为对离子或反离子）加到极性流动相中，使其与被测离子结合，形成疏水性（中性或弱极性）的离子对缔合物。例如，有一反相离子对色谱系统，其固定相是非极性键合相（如ODS），流动相为水溶液，并在其中加入一种与待测组分离子A-相反离子B+，B+由于带静电引力与带负电荷的A-生成离子对化合物A-B+。生成离子对反应式如下：由于离子对化合物具有疏水性，因而被非极性固定相（有机相）萃取，进入固定相被保留。根据待测组分离子的性质不同、反离子形成离子对的能力不同和形成离子对疏水性的不同，导致各组分离子在固定相中滞留时间的不同，因而出色谱柱先后不同，实现分离。（1）分离机制常用高效液相色谱分类及原理02 分离阳离子的反离子试剂有烷基磺酸盐类，如己烷磺酸钠和十二烷基磺酸钠等，适用于分析有机碱和有机阳离子。分析阴离子的反离子试剂有季铵盐类，如四丁基季铵盐、十六烷基三甲基季