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hplc的研发与使用 1 食品药品和复杂体系的分析方法 高效液铬（hplc）是用于科学研究、工农业生产的数据分析。特别在食品药品和复杂体系的分析检测工作中,可以说是必不可少的分析仪器之一。但是,目前在HPLC的研发、生产制造、使用和维修方面还存在很多问题,本文根据仪器学理论和作者的实践,研究总结了一些解决问题的办法,可供有关人员参考。 2 泵、柱、分离器与hplc 目前很多研发和使用HPLC的科技工作者,没有搞清楚或没有完全搞清楚HPLC中的泵、柱、检测器三者的关系,因此制造者生产的HPLC 问题很多,而使用者也不能将HPLC用到最佳水平。积笔者长期的研发和使用HPLC的实践经验,感到生产、使用HPLC时,以下问题特别值得注重。 2.1 部件检验和质量控制 2.1.1HPLC是一个系统,必须将泵、柱、检测器三者(3个部件)结合起来才能叫HPLC。三者都合格,联机后的整机系统才有可能合格,但不能肯定系统就会合格。只有泵、柱、检测器三者质量都合格,并且联机后检测结果也合格,才能说明这台HPLC是合格的。 2.1.23个部件都重要,谁是核心?谁最重要?看法各不相同、各有表述。应该说三者缺一不可,都很重要。 2.1.3笔者长期使用过HPLC,也有多年研发HPLC仪器的工作经历,实践使笔者深深认识到:必须将3个部件联接起来检验测试,并能达到质量指标要求,才能说这台HPLC达到了质量要求。否则,只是部件合格,整机系统不一定能合格。 因为: (1)泵会因为柱子问题产生压力不稳、流量不稳定,会影响HPLC系统的质量; (2)柱对泵影响很大。柱堵塞、柱沾污、柱接头漏液等,都会影响泵的压力波动、使流速不稳定;会影响系统不稳,使RSD变坏、峰拖尾、灵敏度降低; (3)柱对检测器影响很大:柱效降低(柱塔板数降低)、柱堵塞、柱的新旧程度、接头、管道漏液等,都会影响检测器的检测限、分辨率、噪声、和灵敏度。 2.2 及时去换思路,从计量认证标准规范的要求上看,主要是教师 2.2.1过去我国很多公司生产和检验HPLC一般都是将泵、检测器单独生产、单独自检、单独送质检部门检测。经质检部门检验后和未经检测的外购柱一起出厂。对使用者来说,等于买了3个部件,自己组装后使用。在用户那里,因为条件所限,三者联机后自然出现很多问题;其实这些问题都是应该在生产制造、检验过程中得到合理解决的,结果移转换了用户那里。由于用户那里没有条件解决这些问题,于是就将这些问题都归罪于国产HPLC仪器的质量。 2.2.2色谱柱是易损件,用户会经常在色谱柱长时间使用后换新柱, 此时HPLC系统的泵和检测器基本进入“电子元件失效理论的盆底”,比较稳定了。因此,不会因为换新柱而产生仪器不能使用的问题。特别应该指出的是:用户换新柱后,一般不检测系统的综合指标。如果检测指标,可能就不能达到原出厂指标(因为泵和检测器经过较长期使用后,质量会有所下降,旧泵、新柱、旧检测器三者不能达到最佳配备)。用户换新柱不会影响使用的问题,可以从计量认证标准规范(JJG)得到佐证;JJG检验的仪器,很多是在用仪器,它明确规定被检仪器的指标可以比新出厂的仪器指标低,甚至有些指标因为达不到要求而免检。但我们的制造企业,在仪器出厂前,必须检测指标,只有指标达到设计要求时,才算合格,才能出厂。至于用户换新检测器、换新泵,同样都是允许的。但是,如果要求检测换新泵或新检测器后整个系统的指标,则仍然必须要配换新柱。必须是新柱、新检测器、新泵,三者联机检测指标。否则,会由于系统的泵、柱、检测器因使用时间过长而指标下降,会使HPLC系统的检测结果达不到出厂要求。此时用户会怪罪生产公司,认为是仪器不合格。 笔者认为HPLC生产者应该采取的正确做法:泵、柱、检测器三者联起来检验,三者同时入库(编号),三者成套出售。这样才能保证仪器在用户那里的质量。 3 柱外效应的控制 3.1色谱峰拖尾:与柱、流动相的流速、试样等有关,发现拖尾一定要从这些方面查找原因。 3.2如何延长色谱柱寿命:保养很重要,长期不用时需用甲醇浸泡;严格控制洗柱时间或溶剂体积;一般经常使用的柱,下班时应该洗 45分钟或20倍床体积。 3.3必须注意对“柱外效应”的控制: 所谓“柱外效应”,就是指HPLC系统中,除柱系统外,管路、连接件、进样器和流动池的死体积等引起的色谱峰增宽效应。 3.4自动进样时,应该经常检测自动进样器,对仪器进样器要求稳定可靠,手动进样时,应该特别注意取样时的细节,进样时的手感(轻、重、缓、急)等。 4 hplc的研发人员和用户应特别注意对柱质量的评估 5 试剂用量及流速 5.1pH值:一般C18柱pH小于3时,容易损坏色谱柱。但是抗酸性的柱可以使用小的PH值。 5.2注意选择试剂的截止波长:如乙腈截止波长215nm、丙酮截止波长330nm、正丁烷截止