硝酸毛果芸香碱眼用亚微乳的制备及评价.docx

硝酸毛果芸香碱眼用亚微乳的制备及评价 硝基苯乙烯酸酯（pn）是最常用的胆碱药物之一。已经使用了100多年。它直接刺激了膜和帝国之间的中毒卓碱m的受体，导致膜和帝国之间的收缩，打开前屋角，促进梁网结构在前突乳突，并产生抗折射效应。由于水溶性好,PN在眼科临床使用的制剂主要是其溶液剂(PNs)和凝胶剂(PN-gel)。与普通滴眼剂类似,因角结膜囊体积小且眼部存在保护性生理作用(包括眨眼、眼球转动和流泪等),PNs在眼表的滞留时间短,眼部生物利用度低(0.1%~3%),药效维持时间较短,需频繁给药(4次/天)。PN-gel可实现1次/天给药,但其制剂黏度较大(600m Pa·s左右),存在糊视和剂量不准确等不足。 针对硝酸毛果芸香碱在临床应用中的局限性,研究其新型药物传递系统显得尤为重要。其中,亚微乳(submicro emulsion,SE)作为一种新型的眼部给药系统,具有改善难溶性药物溶解度,增加药物脂溶性,减小刺激性,缓释以及提高眼部生物利用度等优点。因此PN/SE可增加PN的脂溶性,进一步提高PN的角膜渗透性,有利于其进入虹膜和睫状肌作用部位,促进吸收。另外,滞留在角结膜囊内的亚微乳可作为药物储库,持续释放药物,实现一定缓释效果。 近年来,研究发现阳离子型眼用亚微乳在眼表铺展更加均匀,并能与眼表带负电的黏蛋白产生静电吸附,眼表滞留时间更长,有利于药物持续吸收。壳聚糖(chitosan,CS)作为一种天然阳离子型黏多糖,具有无毒性、生物黏附性、生物相容性、促渗透性和生物可降解性等众多优良的生物学性质,已被广泛应用于眼用制剂的研究中。本研究将PN包裹于亚微乳中,继而与CS醋酸溶液孵育使得CS包覆在乳滴表面,制成具有黏膜黏附性的亚微乳CS-PN/SE,并对其理化性质和微观形态进行了表征。另外,以硝酸毛果芸香碱的眼用亚微乳PN/SE及溶液剂PNs为对照组,评价了CS-PN/SE在兔眼表滞留特性和缩瞳作用。 cs-pn/se的制备 仪器 动态光散射粒径测定仪(3000HS,马尔文公司,英国);高速分散均质机(FJ-200,上海标本模型厂);旋转流变仪(DV-III,Brookfield公司,美国);透射电子显微镜(H-7650,HITACHI日立集团,日本);HP1100高效液相色谱系统(包括G1311四元泵,G1379A在线脱气机,G1328B手动进样器,G1314A VWD检测器,数据处理色谱工作站:HPchemstation Rev.A.10.01,Agilent公司,美国)。 药品与试剂 硝酸毛果芸香碱(PN,纯度98%,巴西进口,广东利玮医药有限公司分装);硝酸毛果芸香碱溶液剂(PNs,1%,w/v,山东博士伦福瑞达制药有限公司);中链甘油三酸酯(MCT,德国Lipoid公司);Tween 80,Span 80及甘油(南京威尔化工有限公司);油酸(马来西亚进口,江苏无锡市多利佳贸易有限公司);壳聚糖(CS,分子质量约为150 k D,脱乙酰度95%,浙江金壳生物科技有限公司);其他试剂均为国产色谱纯或分析纯。 动物 新西兰白兔,体重(2.5±0.5)kg,中国药科大学实验动物中心提供。(19±1)℃,(50±5)RH,(20±5)lux下于标准笼中饲养,同时标准饮食,任意饮水。 油水分配系数的测定 精密称取PN约800 mg至10 m L量瓶中,用正辛醇饱和的水完全溶解,定容,移取5 m L至具塞试管中,加入被水饱和的正辛醇5m L,制得水-正辛醇(1∶1)的分配液。涡旋30 min后,4 000 r·min-1离心10 min,移取水层20μL至50 m L量瓶,用正辛醇饱和的水定容至刻度,在220 nm波长处测定吸收度,代入标准曲线(A=0.039 7 C-0.0139,R2=0.999 8)中得到水相中药物浓度,用公式P=(C-Cw)/Cw计算表观油水分配系数(C指原来水相中药物浓度,Cw指平衡后水相中药物浓度)。同法操作3次,取平均值。 PN溶解度的测定 测定PN在去离子水、不同的油(Soybean oil、Castor oil和MCT)、表面活性剂(Tween 80、Span 80、Poloxamer 188和Cremorph EL)和稳定剂(Oleic acid和Vitamin E)中的溶解度。取过量PN置于10 m L具塞刻度试管中,分别加入各种油、表面活性剂和稳定剂5 m L,密封,避光,涡旋混匀,于(25±1)℃、150 r·min-1恒温水浴中机械震荡72 h。达到平衡后,4 000 r·min-1离心10 min,取部分上清液用0.45μm微孔滤膜保温过滤。取续滤液,用流动相适当稀释,HPLC检测药物浓度,即得PN的表观溶解度。同法操作3次,取平均值。 CS-PN/SE的制备将处方量的MCT(