绿色木霉菌v-1菌株在烟草三叶定殖中的生长.docx

绿色木霉菌v-1菌株在烟草三叶定殖中的生长 草木菌剂是由土壤中诱导得到的绿色木菌（tt-1）开发的微生物杀菌剂。具有广的光谱抗菌性和抗菌活性。它对主要真菌疾病（如黑草、草赤星病和草猝死等）也有很高的预防效果。在草的生产过程中，木霉素不仅具有上述抗菌作用外，而且对促进烟草素的生长起到了很强的作用。为了进一步研究木霉素的肥效，以及使用后烟草的生理变化，我们研究了木霉素在烟草素中的定位和性质。 1 材料和方法 1.1 材料表面 1.1.1 aviridpers,opfr. Tv-1:绿色木霉(Trichoderma viridPers.Ex Fr.)。 木霉菌剂:颗粒剂有效浓度7×107个孢子/g;粉剂有效浓度3×1010个孢子/g。 1.1.2 试验草品种 K326、G28、NC89、NC82、RG11、云烟85 1.1.3 响应面图 木霉半选择性培养基(TSM):MgSO4·7H2O 0.2g; K2HPO40.9g; KCl 0.25g; NH4NO31.0g; 葡萄糖3.0g; 氯霉素0.25g; 玫瑰红0.15g; 敌克松可湿性粉剂0.3g; PCNB 0.2g; 琼脂20g; H2O 1000mL。 土壤浸渍液琼胶培养基(SA)的制备:取自然土壤1000g,加水1000mL,浸泡一段时间后双层滤纸过滤,按如下成分配制培养基:土壤浸液100mL;琼脂15g;水900mL。然后分装灭菌。 1.2 方法 1.2.1 试验设计与处理 盆栽试验:试验设在云南烟草研究院农业所试验基地,装盆土壤为沙壤土,装盆体积24L,品种为K326,用于测定生理生化指标。 大田试验:试验设在红塔区北城镇(水稻土)、峨山县小街镇(红壤)、江川县安化乡(紫色土),品种为K326,用于测定大田烟株性状。 处理设置:试验从不同营养水平与不同木霉制剂用量水平两方面进行研究,采用裂区试验设计处理。以施肥量(0、4、8g N/株,N∶P2O5∶K2O=1∶1∶2)为主处理,木霉菌剂用量(0、45kg/hm2)为副处理,处理组合见表1。盆栽每个处理栽10盆,田间试验处理随机排列,3次重复,每小区植烟50株以上,栽烟行株1.1m×0.6m。 肥料利用率与生理生化测定:在测定生物量和N、P、K含量的基础上,用差减法测定氮、磷、钾肥料利用率。烟叶叶绿体色素、硝酸还原酶(NR)活性和游离脯氨酸(FPro)、丙二醛(MDA)的含量用比色法测定。 1.2.2 tv-1接种量的测定 烟苗的准备:供试烟草种子先经1%的NaClO表面消毒5min,再用灭菌水漂洗3次,然后在灭菌条件下吸胀24h,倒掉灭菌水后再用新灭菌水漂洗3次,取出烟草种子置于经灭菌含湿滤纸上,灭菌条件下风干,催芽3d后播入无菌土中,放入培养箱中培养至5～7叶期移入上述试验土中。 叶面接种:用无菌水多次冲洗叶片,将Tv-1摇瓶培养液均匀喷至叶面(叶面叶背均要喷),喷后4h第一次取样,以后每隔7d取一次样。 Tv-1叶面定殖动态:PD培养液培养5d的Tv-1菌液,经离心后用无菌水悬浮,调节到108cfu/mL。用经70%酒精消过毒的手持喷雾器喷雾,直到叶面上均匀布满一层细微水珠而不流淌为止。喷雾后1h取第一次样,以后每隔一周取一次样,共4次。每次每处理取的叶片剪成0.5cm小段,无菌水中振荡(120r/分)洗30min。取稀释液涂布于木霉半选择性培养基(TSM)上,28℃下培养10d,5皿重复,计菌落数。以第一次取样所检测到的菌量为接种量。菌量以cfu/g叶表示。 电镜样品处理及观察:将所取样品切成小片,于3%戊二醛中固定3h,然后丙酮梯度脱水,醋酸异戊酯置换,二氧化碳临界点干燥,喷金后扫描电镜观察,照相。 1.2.3 培养条件检查结果 烟苗的准备:同一种影响因素试验的不同处理所使用的烟苗均于相同Tv-1孢子含量的悬浮液中浸泡1h。移入不同处理的SA中后,分别于3d,6d,9d时检查结果。检查时,分别称剪取幼根0.01g,研磨成浆状,稀释一定倍数涂于TSM上培养5d后,计菌落数。 水分含量测定:将SA分别按琼脂含量为0.5%、1.5%、3%、5.0%、7.0%、9.0%配制。 pH值测定:将SA分别配制成pH值为4、5、6、7、8、9。 不同培养基测定:将上述烟苗培养于SA、WA(水洋菜平板)、GA(2%葡萄糖洋菜平板)。 不同烟草品种准备:分别于SA上培养以上6种不同品种烟苗。 2 结果和分析 2.1 木霉剂肥效果 2.1.1 木霉菌剂的对比试验 在玉溪市红塔区北城镇进行了苗期(袋苗)施用木霉菌剂的对比试验,指出木霉菌剂对烤烟袋苗有较好的促生效果。其株高、叶数及叶片长宽比对照增加10%左右,而根、茎、叶比对照增加50%～80%(表2)。 2.1.2 不同土壤、红土、水土流变对红土促生的影响 从表3、表4和表5可以