柴胡挥发油的提取及对内毒素所致家兔体温升高的作用.docx

柴胡挥发油的提取及对内毒素所致家兔体温升高的作用 柴胡作为一种常见的中药，用于感冒、冷热、肝郁气滞。它具有解暑、舒肝、提阳洞的功效。2010年版中国药典规定柴胡为伞形科植物Bupleuurm chinenseDC.或狭叶柴胡Bupleurum scorzonerifoliumWild.的干燥根。现代研究表明,柴胡主要活性成分为柴胡皂苷类和挥发油。柴胡挥发油常用于制作柴胡注射剂,用于治疗感冒发热等症,有显著疗效。王智华等对柴胡注射剂中的有效成分进行了气相色谱分析,刘群等对柴胡挥发油中的化学成分进行了分析,但其化学成分中哪类成分或哪种成分是柴胡解热作用的有效成分并未见报道。且柴胡注射液中的指标性成分一直未明确,这给药品的质量控制带来困难。为探索柴胡挥发油中起解热作用的有效部位,作者进行了实验研究。 1 设备和材料 1.1 色谱柱及试剂 GC-MS仪(7890A GC/6410MS型 美国安捷伦公司);HP-5MS毛细管色谱柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm);电子天平(N24120型 瑞士 奥豪斯);色谱柱(Φ1 cm重庆化学试剂玻璃仪器公司);中草药粉碎机(RT-08型 北京鑫环亚科技有限公司);高压灭菌仪(MLS-3750型 日本三洋电器)。 1.2 高效液相色谱法 乙醚、甲醇、石油醚、乙酸乙酯(分析纯,重庆川东化工有限公司);乙醚(色谱醇,重庆川东化工有限公司);浓硫酸(重庆川东化工有限公司);吐温80(药用级,上海晶纯实业有限公司);薄层色谱硅胶G(青岛海洋化工有限公司);柱色谱硅胶(300~400目,青岛海洋化工有限公司);北柴胡(购于重庆市储奇门中药材市场,按2010年版中国药典柴胡的鉴定方法,经重庆医科大学药学院生药学教授刘新鉴定为柴胡Bupleurum ChineseDC.的干燥根 );新西兰大白兔[购于重庆医科大学实验动物中心合格证号:SCXK(渝)2007-0001];美国Sigma公司精制大肠杆菌内毒素(LPS);柴胡注射剂 (自制) 2 方法和结果 2.1 柴胡提取物的提取、分离和鉴定 2.1.1 提取权限 称取柴胡干燥根,粉碎,过20目筛,蒸馏水浸泡过夜,水蒸气蒸馏6 h,分取挥发油,出油率约0.03%。 2.1.2 酯的制备 取柱色谱硅胶,110℃活化1 h,干法装柱。采用梯度洗脱,按照石油醚:乙酸乙酯为1∶0、18∶1、15∶1、11∶1、7∶1、5∶1、0∶1,最后甲醇洗脱的比例依次洗脱,收集的组分用薄层色谱检识,香草醛硫酸试液显色,110 ℃烘至斑点清晰。合并相同组分,得5种不同组分(1~5号),用CO2气体吹去溶剂。 2.1.3 gc/ms色谱条件 色谱条件:色谱柱:HP-5MS柱(Crosslinked dimethyl polysiloxane,30 m×0.25 mm×0.25 μm);柱温:50 ℃,以3.5 ℃·min-1升至270 ℃;载气:N2,0.9 mL·min-1;分流比:10∶1;进样口温度250 ℃;温度:270 ℃;进样量:1 μL。 质谱条件:在相同色谱条件下,电离方式EI,离子源温度300 ℃,电子能量70 eV;采集方式:扫描,扫描质量范围m/z10~800;载气为He。 供试品处理:取柴胡挥发油,用乙醚稀释;另取“2.1.2”项下分离所得组分1~5,分别用乙醚稀释。 结果:柴胡挥发油GC-MS总离子流图及分析结果见图1、表1,组分1~5挥发油GC-MS总离子流图及分析结果分别见图2~6和表2~6。 2.2 柴胡提取物分离后的解热效果研究 2.2.1 柴胡注射液的制备 参照柴胡注射液质量标准(WS3-B-3297-98)制备。得柴胡全挥发油注射液和柴胡挥发油单组分注射液(1~5号)。 2.2.2 肌肉注射给予大鼠进行急性毒性实验 新西兰大白兔,体重在2~2.5 kg。每天定时测量体温3次,每次间隔10 min,连续测3 d;选取体温波动在±0.2 ℃以内的动物随机分为7组,于实验前一晚开始禁食。实验当天,肌肉注射内毒素200 ng·kg-1,1 h后,测体温。第1组肌肉注射2 mL柴胡挥发油注射液·只-1,第2~6组分别肌肉注射 2 mL 1~5号柴胡挥发油单组分注射液·只-1,第7组肌肉注射 2 mL生理盐水·只-1,并分别测量给药后1、2、3、4、5 h的体温。统计各组兔体温与其相应基础体温之差,结果见表7。 表7显示,给药5 h后温度基本降至基础体温。柴胡全挥发油注射液及组分2注射液在给药后2 h使实验动物体温下降,组分2的体温下降速度比全挥发油快。 3 结论 以内毒素致兔体温升高为实验模型,显示柴胡挥发油中具解热作用的主要部位在组分2。 4 使用中药及中西药 柴胡是传统常用中药,关于其皂苷和挥发油的提取方法和鉴定方法的报道很多。现代药理学证明其