山楂叶总黄酮提取工艺研究.docx

山楂叶总黄酮提取工艺研究 山楂是蔷薇科植物的一种回族植物。请注意，它含有大量黄酮类化合物，如牡荆素、牡荆素-4、牡荆素-4、七-葡萄糖苷、琥珀酸乙酯籽，对心脑血管疾病有显著疗效。 有关山楂叶总黄酮提取研究报道最多的是乙醇提取法和以乙醇为介质的新方法,如吕帮玉等对超声强化山楂叶总黄酮的提取工艺进行了研究;王立娟等探讨了微波辅助提取山楂叶总黄酮的条件;李宏伟等研究了超高压提取山楂叶中黄酮类化合物的工艺参数。这些方法虽然提取率高、提取液的杂质含量少,但其提取过程乙醇的消耗量大,乙醇回收能耗高,再加上新方法所需设备投资费用高和原料处理量过小问题,因而不适宜一些中小企业的工业化生产。山楂叶总黄酮的另一种提取方法是水浸提法,如周桂等报道超声波法水提取山楂叶中黄酮的研究;郭永学等以水为浸提剂,对山楂叶总黄酮的微波辅助萃取工艺条件进行了研究;这两种方法同样涉及所需设备投资费用高和原料处理量过小问题。王晓等报道酶法提取山楂叶中总黄酮的研究,其提取介质水溶液p H为4.5,考虑到该酸度对设备的腐蚀及提取废液的污染问题,也不是工业化生产的最佳方法。相比之下,单纯的水浸提法虽然提取率稍低、提取液的杂质含量高,但其投资成本低、可操作性强以及对环境的污染小,是最具有工业化前景的提取方法。 目前大孔吸附树脂用于精制山楂叶总黄酮的研究报道最多,主要涉及树脂型号有D101和HPD-600,根据这些文献分析,D101型大孔吸附树脂法具有吸附快、解吸率高、产物纯度高及树脂再生简便等特点。此外,文献报道,采用ZTC-II型天然澄清剂对山楂叶总黄酮酶解提取液进行处理,在不影响活性成分黄酮的情况下,有效除去提取液中的鞣质、蛋白质等不稳定成分,使提取液得到澄清;可以弥补水浸提法的不足,如提取液对树脂的污染,树脂的吸附-解吸速率慢等问题。因此,本文重点考察山楂叶总黄酮单纯水浸提法工艺,然后在用吸附澄清剂预处理的基础上,探讨和大孔吸附树脂精制耦合综合工艺。 1 材料和方法 1.1 仪器和试剂 山楂叶:山西中晋药业有限公司,使用前用清水洗净,置于烘箱在60℃下干燥,然后粉碎过20目筛保存备用;芦丁对照品:中国药品生物制品检定所;ZTC-II型天然澄清剂:天津正天成澄清技术有限公司,其A组分用蒸馏水配制成1%的水溶液,预溶胀24 h;B组分用1%醋酸溶液配制成1%的溶液,预溶胀24 h;D-101树脂:天津市海光化工有限公司;甲醇、乙醇、亚硝酸钠和硝酸铝均为分析纯。 UV-2550PC紫外可见分光光度计:日本岛津公司;AB204-S型分析天平:瑞士METTLER TOLEDO公司;LABOROTA 4000旋转蒸发仪:德国Heidolph公司;EYELA FDU-2200型冷冻干燥机:日本Thermo Electron公司;SHZ-III型循环水真空泵:上海亚荣生化仪器厂;PHSJ-A精密pH酸度计:北京光学仪器厂;玻璃层析柱:Φ30 mm×500 mm。 1.2 山楂叶总黄酮的代谢 1.2.1 来水用量的测定 将芦丁标准品于120℃下干燥至恒重,准确称取芦丁0.014 6 g,用60%(体积分数,下同)乙醇溶解,定容于50 m L,得浓度为0.292 g/L芦丁标准液。 精密量取芦丁标准溶液0、2.5、5.0、7.5、10.0、12.5 m L于25 m L容量瓶中,加入5%的Na NO2溶液0.75 m L,摇匀,放置6 min后加入10%的Al(NO3)3溶液0.75 m L,摇匀,放置6 min后加入4%Na OH溶液10.0 m L,用30%乙醇定容,摇匀,10 min后于510 nm处测定吸光度A。计算得芦丁含量Y(mg/L)与吸光度X间的回归方程为:Y=0.011 1X+0.010 7,r=0.999 7,线性范围为0 mg/L~150 mg/L。 1.2.2 萃取物的制备 准确称取5.000 g山楂叶粉末装入滤纸筒,用脱脂棉封口后置于索氏萃取器中,用150 m L甲醇萃取,80℃水浴加热回流,待索氏萃取器中的萃取液接近无色时(约6 h)结束。将萃取液真空浓缩回收甲醇至近干,用60%乙醇溶解所得萃取物并定容至250 m L。然后按照测定芦丁标准液吸光度的测定条件测定吸光度。重复测定3次,结果取平均值。 1.2.3 黄酮的测定 1.2.3. 提取山楂叶总黄酮的测定 先把液体样品定容至适当体积,过滤,弃去初滤液,精密量取滤液1 m L,置于50 m L容量瓶中,加95%乙醇至刻度,摇匀。再从中取2.0 m L于25 m L容量瓶中,以下操作同1.2.1,测定山楂叶总黄酮含量(试验重复3次,取平均值);计算山楂叶总黄酮的提取率。提取率按公式(1)计算。 1.2.3. 山楂叶总黄酮纯度的测定 精确称取黄酮提取物0.100 0 g,用95%乙醇定容至25m L,摇匀,过滤,