植物精油对烟草黑胫病的抗治作用.docx

植物精油对烟草黑胫病的抗治作用 草场上的黑胫骨疾病是由杂草杆菌（dat.）引起的。这是世界上最严重的卷烟植物栽培疾病之一，也是中国烟草种植区的主要疾病。据不完全统计,平均每年因该病给烟草种植造成的损失达1亿元以上。目前烟草黑胫病防治药剂主要是甲霜灵,但由于其作用位点单一、药剂选择压力及天然抗性群体的存在,使烟草疫霉抗药性逐年增强,对烟草黑胫病的大范围发生难以起到控制作用。因此,新型烟草黑胫病防治药剂的开发与应用势在必行。 植物源农药作为生物农药的一类,其开发利用对有害生物防治的前景十分广阔。植物源农药与化学农药相比具有低毒、无残留、选择性高及不易使害虫、病菌产生耐药性的特点,是一种与环境有良好相容性的新型环保农药。精油源于植物的果实、叶片、茎秆、种子、花和根等,是植物次生代谢的香气成分和挥发性产物,是一种重要的植物源农药。目前已有文献报道植物精油对疫霉属病害抑制作用的研究。对烟草疫霉的防治,仅Bowers等通过丁香油和胡椒芥子油混合液、肉桂提取物以及合成肉桂油对土壤中烟草疫霉菌丝、孢子囊及厚垣孢子的抑制作用进行了相关报道,但未在烟草体内进行相关评价。 柠檬草、罗勒、椒样薄荷、茶树和桉叶在中国普遍种植,材料来源广泛,精油的化学成分和抗细菌、抗真菌活性已有大量报道,但其体外和体内的抗烟草疫霉活性尚未见评价。本研究通过体外菌丝生长抑制试验筛选抑制烟草疫霉菌丝生长的有效精油及浓度,并结合温室体内预防和治疗试验确定烟苗病情指数,计算相对防效,以期为新型农药的开发与应用奠定理论基础。 1 材料和方法 1.1 材料表面 1.1.1 试验中的蘑菇 烟草黑胫病菌株由云南省农业科学研究院环境资源研究所植物病理室提供。采用燕麦培养基(OA),培养温度26 ℃。 1.1.2 给草药的连接 主栽品种K326为黑胫病接种材料。采用漂浮盘育苗,于玻璃温室内进行。期间剪叶2次,待苗龄60～70 d时进行接种试验。 1.1.3 提取的提取材料 柠檬草、罗勒、椒样薄荷、茶树和桉叶鲜叶均采自上海交通大学农业与生物学院植物园,采摘后平铺于摊晾室,待阴干后作为精油提取材料。 1.1.4 给药处方的比较 以市售药剂烯酰氟吗·甲霜灵锰锌58%可湿性粉剂2 000倍(推荐浓度190 μg/mL,JSL2000)药液为阳性对照。 1.2 方法 1.2.1 精油的提取 分别准确称取5种植物材料500 g,注入蒸馏水3 L,采用水蒸气蒸馏法提取精油,3 h后收集精油并用无水Na2SO4干燥,置于棕色瓶内4 ℃低温保存。 1.2.2 油乳液 以吐温-80为乳化剂,无菌双蒸水为溶剂配制成浓度为48 mg/mL的精油药剂母液,吐温-80终含量为0.5%。 1.2.3 真菌生长率试验 (1) 精油的稳定性测定 取培养3周的烟草疫霉平板,用打孔器沿其外围取5 mm菌丝块,将其均匀摆放于精油浓度为240 μg/mL的OA培养基内,每平板接种3个菌丝块,设置3个重复,以0.5% 吐温-80为对照。培养3 d后采用十字交叉法测定菌落直径,计算菌落生长抑制率,计算公式如下: (2) 培养基平板 选取柠檬草、罗勒和椒样薄荷精油,分别配制含精油浓度为400、320、240、160、80、40、20、10 μg/mL OA培养基平板。具体接种及计算方法参照(1)。 1.2.4 温室预防和治疗 (1) 棉田浅排液对棉花保湿的作用 参考Keller等方法并稍加改进,具体步骤如下。 预防试验:取苗龄60～70 d烟苗,使用刀片轻轻划伤茎基部表皮,立即进行基部药剂喷施处理,覆棉花保湿,24 h后将直径0.5 cm菌丝块置于基部划伤处。治疗试验:取苗龄一致的烟苗并使用刀片轻轻划伤茎基部表皮,将直径为0.5 cm的菌丝块置于基部划伤处,并覆棉花进行保湿,24 h后去除棉花并对基部喷药处理,并再次覆盖棉花保湿。精油药液浓度分别为160、320、480和640 μg/mL,以JSL2000为药剂阳性对照,0.5% 吐温-80水溶液为空白对照。每处理6株烟苗,设置3个重复,于7 d后记录病情。 (2) 病情调查及评价标准 以株为单位进行调查,病害严重程度依据茎基部病斑扩展程度分级。病害分级标准、调查方法及病情指数、相对诱导效果计算按照中华人民共和国国家标准(GB/T 23222-2008)的规定进行。病情指数和相对诱导效果计算公式如下: 1.2.5 数据分析 主要由Excel、SPSS统计软件完成。 2 结果 2.1 真菌生长率试验 2.1.1 植物精油的抑制作用 将直径5 mm菌落置于精油浓度为240 μg/mL的OA培养基平板上,采用菌丝生长速率法,3 d后进行统计。结果图1 所示:5种植物精油对烟草疫霉均有一定程度的抑制作用。其中,柠檬草和椒样薄荷效果明显,菌落生长百分抑制率分别为90.06%和89.86%,两者