6种木霉对人参锈腐病的拮抗作用.docxVIP

6种木霉对人参锈腐病的拮抗作用 由双壳菌引起的人参锈腐烂是人参最重要的疾病之一。这种病毒广泛存在于土壤中，可通过种子、病根残留物、土壤、昆虫和线虫传播，并直接进入主表皮。其厚壁孢子在正常情况下可存活3～4年,菌丝体在水淹72h以上才能失去生长能力。人参锈腐病是人参产区分布最广和发病时间最长的地下病害,从播种到各参龄都有发生,严重影响了人参的产量和品质,给参农带来了巨大的经济损失。 木霉菌(Trichodermaspp.)是一类具有重要利用价值的拮抗真菌,它能通过竞争、抗生、重寄生等作用抑制植物病原菌,还能诱导植物抗性,增强植物自身对病原菌的抵抗能力。近年来,国内外已有很多关于木霉菌防治植物病害的报道[5,6,7,8,9,10,11,12,13],研究表明该属的一些种对土传性植物病害确有较强的抑制作用。邢云章等用绿色木霉(T.viride)防治人参根腐病,丁万隆等利用木霉菌剂防治西洋参立枯病均取得了显著效果。用木霉菌防治人参锈腐病的报道很少,吴连举等利用木霉菌防治人参锈腐病,室内抑菌作用较好,但田间防治效果不佳。本文选用6株木霉菌对人参锈腐病进行防效试验,旨在探讨木霉菌对人参锈腐病的作用效果和作用机理,为木霉菌的田间应用提供依据。 1 材料和方法 1.1 土壤肥料研究 病原菌菌株: 毁灭柱孢菌为中国农业科学院特产研究所吴连举提供。木霉菌菌株: 哈茨木霉(T.harzianum)T1、绿色木霉T2、深绿木霉(T.atroviride)T3、康氏木霉(T.koningii)T4购自中国农业科学院土壤肥料研究所,绿色木霉T5和T6分离自吉林省安图县二道白河镇人参根际土样。 病原菌和木霉的培养及拮抗试验均采用PDA培养基。 1.2 内部抗强试验 1.2.1 单培养期间，木霉和细菌的生长 在PDA平板(直径为9cm)中央接种直径为0.5cm的病原菌及木霉菌菌丝块,25℃培养,每隔12h测量病原菌及木霉菌的菌落半径。 1.2.2 病原菌对木霉菌的抑制率 在PDA平板中央接种直径为0.5cm培养7d的病原菌菌丝块,25℃恒温培养,3d后距病原菌3cm处等距离接种4个同样大小的木霉菌菌丝块,25℃培养4d,以只接病原菌的平板为对照,每处理3次重复。每隔12h测量病原菌指向木霉菌的半径(rTn,n=1,2,3,4,5,6)及对照病原菌菌落半径(rCK),参照Melo等的方法评价木霉菌与病原菌之间的拮抗关系; 计算木霉对病原菌的抑制率; 木霉菌与病原菌接触后观察木霉菌及病原菌的生长情况。抑制率=(对照病原菌菌落半径-对峙培养病原菌菌落半径)/(对照病原菌菌落半径-原菌饼半径)×100%。 1.3 田间处理与人参锈腐病发病 木霉菌剂的制备: 新鲜麦麸加蒸馏水调至含水量为65%左右,分装至罐头瓶中,每瓶不超过其容量一半,121℃灭菌45min; 冷却后接入木霉菌种,25℃培养5～7d。待菌落将固体培养基全部覆盖后即可使用,施用前检测每克菌剂中孢子的数量。 试验设置于吉林省集安市北方药材有限公司农田参试验田; 两年生人参苗由北方药材有限公司提供,大小一致,健康、无病; 栽参前将木霉菌剂与灭菌细土充分混合,使细土中孢子含量达到1.6×106孢子/g,每小区200g细土均匀施入参床,小区面积2m2,每小区栽人参75株,随机排列,3次重复,以施入相同质量不接菌的麦麸培养基为对照,田间管理常规。秋季收获时调查人参锈腐病发病情况。人参锈腐病病情分为5个级别,0级: 参根无病斑; 1级: 参根病斑占表面积25%以下; 2级: 参根病斑占表面积26%～50%; 3级: 参根病斑占表面积51%～75%,外观受严重影响; 4级: 参根病斑占表面积76%以上或完全腐烂。病情指数=∑(发病级别代表值×该级的株数)/(发病最重级别代表值×总株数)×100; 防治效果=(对照病情指数-处理情指数)/对照病情指数×100%。 1.4 木霉对人参产量的影响 收获时用软毛刷轻轻去除根茎上的泥土,装入塑料自封袋,写好编号,带回实验室称重。 1.5 处理数据 用One-way ANOVA进行单因素方差分析,用LSD进行差异显著性检验。以软件SPSS15.0进行数据的统计分析。 2 结果与分析 2.1 病原菌菌落生长、分散性测定 木霉菌和病原菌单独培养时木霉菌株生长速度比人参锈腐菌快。将木霉菌株接种到PDA平板进行对峙培养发现,T1约36h,T2、T3、T5、T6约48h与病原菌菌菌丝接触,在接触处病原菌菌丝变褐,而木霉菌则可在病原菌菌落上生长、产孢,最后覆盖病原菌菌落; T4与病原菌菌落不相交而是产生明显的抑菌带,随着木霉菌的生长抑菌带缓慢向病原菌推移,病原菌菌落逐渐萎缩; 显微观察发现病原菌菌丝有断裂现象。6株木霉菌对人参锈腐菌均具有较强的抑制作用(表1),其中T1的抑制效果最好,拮抗