丁香油对食品质量中常见的腐败菌和产毒素菌的抑制作用.docx

丁香油对食品质量中常见的腐败菌和产毒素菌的抑制作用 丁香油的提取 在储存过程中，食品容易受到微生物的污染而腐败。使用抗生素可以预防腐败。这是储存食品的有效手段之一。但在使用过程中, 人们逐渐发现有不少化学防腐剂影响人体的健康, 因此, 开发食品天然防腐剂已成为当今食品保藏研究的热点。 丁香油是从丁香树的花蕾、叶子等提取的芳香精油, 为我国GB2760-86规定允许使用的食用香料。针对我国丁香资源比较丰富以及丁香在食用香料中良好的抑菌效果, 本文就丁香油对食品中常见的腐败菌和产毒素菌的抑制作用进行了较深入的研究。 1. 材料和方法 1.1 试剂 丁香、丁香油、丁香酚、丙三醇、单硬脂酸甘油酯。 1.2 菌株计算公司的菌株 黄曲霉 (Aspergillus flavus) 、烟曲霉 (Asp.fumigatus) 、产黄青霉 (Penicillium chrysogenum) 、桔青霉 (Pen.citrinum) 、粘红酵母 (Rhodotorula glutinis) 、枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis) 、金黄色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus) 、福氏痢疾杆菌 (Shigella flexneri) 、鼠伤寒沙门氏菌 (Salmonella typhimurium) 、大肠杆菌 (Escherichia coli) 。由本院食品微生物学实验室提供。 1.3 培养基 CA用于培养青、曲霉;PDA用于培养酵母菌;营养琼脂用于培养细菌。所有培养基均符合GB4789.28-94标准。 1.4 试验菌或菌悬液的制备 将上述各种供试菌种用适宜斜面培养基活化, 以无菌生理盐水制成102～103cfu/ml的孢子或菌悬液。 1.5 方法 1.5.1 欧洲丁香组的分离 利用水中蒸馏法将丁香分成两部分:丁香油和残留物, 将两组分做抑菌试验, 以确定丁香抑菌成分分布的组分。 1.5.2 最低丁香油浓度的确定 将丁香油用丙三醇稀释, 以不同浓度 (以培养基量100ml为标准, 加0.02ml、0.04ml、0.06ml、0.08ml、0.1ml丁香油) 加入相应培养基 (标准pH值) , 灭菌、冷却至45℃后加入培养皿 (事先已加入1ml供试菌的孢子或菌悬液) , 混匀, 适温适时培养, 观察结果, 以完全没有菌生长的最低丁香油浓度为丁香油对某菌的MIC值。 1.5.3 丁香油组分的分离和各组分的抗菌试验 1.5.3. 研磨法制备带模 称取硅胶G234后加入2～3倍水, 放于研钵中研磨至粘稠, 倒入涂布器中制成薄板, 活化、烘干后点样, 放于展开剂中展开, 于波长2537nm紫外光下观察。 1.5.3. 抑菌圈大小测定 孢子或菌悬液与相应培养基混匀制成平板, 在平板中央放置直径10mm的滤纸片, 将丁香油各组分滴在滤纸中央, 以不加组分的为空白对照, 定温、定时培养后观察并测量抑菌圈大小。 2. 结果与讨论 2.1 丁香的抑菌效果 利用水中蒸馏法从丁香中提取丁香油, 经计算, 产油率为13.4%, 用蒸馏后的残留物对供试菌种进行抑制实验, 表明残留物对供试菌种无抑制作用, 说明丁香的抑菌成分富集于丁香油中。 2.2 丁香油的抑菌作用 本实验选用的10个供试菌种是食品中常见的腐败菌和产毒素菌, 因此, 以它们作为研究对象有一定的代表性。 丁香油对供试菌种的最低抑菌浓度 (MIC) 如表1所示, 从表中可以看出, 丁香油对大多数的供试菌最低抑制浓度为0.04ml/100ml。 丁香油用于食品特别是饮料、汤料等非油性液体或半固体食品需事先乳化。本实验按常规方法乳化, 测定不同浓度的丁香油的乳化液的MIC, 结果显示, 经单硬脂酸甘油酯乳化的丁香油的MIC值显著降低, 对大多数供试菌最低抑制浓度为0.02ml/100ml, 抗菌能力增加一倍, 这可能与丁香油的分散度提高有关。 2.3 丁香油组分的分离和各组分的抗菌试验 丁香油为混合物, 可通过薄层层析法将各组分分离, 分离得到的各组分对供试菌种进行抑制试验, 得到丁香油的有效抑菌成分。 2.3.1 丁香油的表征 丁香油在硅胶薄层板上点样, 在展开剂 (氯仿∶石油醚=1∶1) 展开后, 于波长2537nm紫外光下观察, 如图1所示, 从图中可以看出, 丁香油的薄层板上有三条谱带 (Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ) , 其中Ⅲ带组分含量最多, 且Rf值与标准丁香酚相同。将丁香油薄层板上的各层析谱带连同硅胶分别刮下, 各组分用无水乙醚提取, 得到各组分。 2.3.2 丁香酚是丁香油的抑菌成分 将薄层层析分离得到的丁香油三个组分分别对黄曲霉、产黄青霉、粘红酵母和大肠杆菌进行抑制试验, 如表2所示, 结果表明, 只有Ⅲ组分有明显的抑菌圈, 而其余两组分无抑菌圈, 故Ⅲ组分 (即丁香酚) 是丁香