黄曲霉毒素检测.ppt

第一页，共十九页，2022年，8月28日 ? 黄曲霉毒素(aflatoxin，简称为AF)是到目前为止发现的毒性最大的真菌毒素。 它可通过多种途径污染食品和饲料，直接或间接进入人类食物链，威胁人类健康和生命安全，对人体及动物内脏器官尤其是肝脏损害严重，该毒素是黄曲霉和寄生曲霉中产毒菌株的代谢产物，普遍存在于霉变的粮食及粮食制品中。黄曲霉毒素十分耐热，加热至230℃才能被完全破坏，因此一般烹饪加工也不易消除。 黄曲霉毒素介绍? 第二页，共十九页，2022年，8月28日 黄曲霉毒素分布范围广 黄曲霉毒素存在于土壤、动植物、各种坚果（特别是花生和核桃中）中。日常检验发现在大豆、谷物、玉米、通心粉、调味品、牛奶、奶制品、食用油等制品中也经常发现黄曲霉毒素（其中以花生和玉米污染最严重）。 第三页，共十九页，2022年，8月28日 毒性极强 黄曲霉毒素进入人体后主要经消化道吸收，大部分分布 在肝脏、肾脏。因此主要引发肝癌、胃癌等，还可以诱发骨癌、肾癌、直肠癌、乳腺癌、卵巢癌等。黄曲霉毒素如不连续摄入，一般不在体内积蓄。一次摄入后约1周将大部分排出。只有严重霉变的粮食才可能会含有大量毒素，导致急性毒性。 第四页，共十九页，2022年，8月28日 耐热性强 在一般的烹调加工温度下，黄曲霉毒素被破坏的很少；即使是 200℃高温加热，也不能完全正确破坏。一般黄曲霉毒素的裂解温度为280℃，黄曲霉毒素 B1 的裂解温度为 268℃。 第五页，共十九页，2022年，8月28日 黄曲霉毒素的种类 迄今为止发现的黄曲霉毒素主要有4种：即B1、B2、C1、G2，其中B1被认为是主要的有毒物质，有2种这些毒素的代谢产物M1和M2。 其中黄曲霉毒素B1主要存在于农产品，动物饲料，中药等产品中；黄曲霉毒素M1是动物摄入黄曲霉毒素B1后在体内经羟基化代谢的产物，一部分从尿和乳汁排出，一部分存在于动物的可食部分，如乳、肝、蛋类、肾、血和肌肉中，其中以乳最为常见。 黄曲霉毒素M1的毒性和致癌性与黄曲霉毒素B1的基本相似。由于牛乳及其制品是人类、特别是婴儿的主要食品，所以其危害性更大。 第六页，共十九页，2022年，8月28日 中国食品中黄曲霉毒素的限量标准 标准 食品种类 最大限量 GB2761-81 玉米、花生仁、花生油 20μg/kg 大米、其他食用油 10μg/kg 其他粮食豆类、发酵食品 5μg/kg 婴儿代乳食品 不得检出 GB9676-88 牛乳及其制品 0.5μg/kg 第七页，共十九页，2022年，8月28日 免疫分析法 仪器分析法 化学分析法 生物鉴定法 检测方法 第八页，共十九页，2022年，8月28日 黄曲霉毒素的检测方法 目前，测定食品中的黄曲霉毒素的方法有：薄层层析法、液相色谱法、放射免疫分析法、酶联免疫法、亲和层析法、微柱筛选法、金标试纸法等。 这些方法或多或少都具有如下不足之处：? （1）、在操作过程中，需要使用剧毒的黄曲霉毒素M1作为标定标准物，对操作人员造成巨大的沾 污危险，而且黄曲霉毒素M1标准物质购买十分困难。? （2）、操作过程烦琐、复杂、时间长，劳动强度大。? （3）、仪器设备昂贵、笨重、操作复杂，难以实现现场快速分析。 （4）、灵敏度较差，重复性很难得到满意结果。 第九页，共十九页，2022年，8月28日 薄层色谱法（TLC） 其原理是:样品经提取、浓缩、薄层分离后,在365 nm波长的紫外光照射下,黄曲霉毒素B1、B2产生紫色荧光,G1、G2产生绿色荧光,然后根据其在薄层板上显示的荧光的最低检出量来定量。 优点是:所用的试剂、设备简单,费用低廉,容易掌握,适用大量样品的分离、筛选,一般的实验室均可开展,属于定性和半定量的功能。 第十页，共十九页，2022年，8月28日 高效液相色谱法(HPLC) 以C18柱为固定相,以水+异丙醇+乙腈(80 +12+8)为流动相,用荧光检测器进行检测,其激发波长365 nm,发射波长450 nm,以保留时间定性，峰面积定量，这些基本参数大致相同，但在流动相的选用上却差异较大。样品用甲醇和水混合液进行萃取,随后进行衍生化处理,处理后溶解于流动相,进行液相色谱测定。 第十一页，共十九页，2022年，8月28日 酶联免疫吸附法(ELISA) 是抗原(抗体)吸附剂和用酶标记的抗体(抗原)与标本中的待测物(抗原和抗体)起特异的免疫学反应，用测定酶活力的方法来增加测定的敏感度。大致采用两种方式检测黄曲霉毒素，一种是用双抗体夹心法，另一种是用竞争法。 第十二页，共十九页，2022年，8月28日