加味茵陈五苓散保肝作用的实验研究.docx

加味茵陈五苓散保肝作用的实验研究 陈素苦艾酒盐是在陈素陈五苓散的基础上添加陈素陈。具体药物包括：碱陈30克、腹泻15克、煎剂15克、猪苓15克、白术15克、白背叶根30克、叶下珠20克（又名珍珠草）和黄原荷花15克。因此，五苓散除生姜、五苓散（珍珠草）、黄原荷花，以及治疗肝气疾病的现代中药。具有清热除湿、益气健脾、活血化瘀、活血化瘀的功效。本方剂主要用于治疗病毒性肝炎、酒精性肝炎、肝粥样硬化等疾病，并能改善患者的肝功能和临床症状。 现代研究表明, 免疫损害机制在病毒性肝炎尤其是乙型肝炎发病过程中起主要作用。本实验在中医理论指导下, 基于以上的研究基础, 以卡介苗 (BCG) +脂多糖 (LPS) 所致免疫性肝损伤小鼠为研究对象, 观察加味茵陈五苓散对免疫性肝损伤的保护作用, 并初步探讨该方防治肝损伤的作用机理, 从而为加味茵陈五苓散治疗病毒性肝炎提供实验依据, 也为该方的进一步研究打下基础。 1 材料和机器 1.1 小鼠的分组实验 NIH小鼠, 90只, 雌雄皆用, 体重20～26 g, 6～8周龄, 清洁级, 由广州中医药大学实验动物中心提供, 合格证号2008A015。小鼠在恒温25～28℃, 光照正常的环境中进行7 d适应性喂养后, 分组进行实验。随机分为空白对照组、模型对照组、阳性对照组、加味茵陈五苓散高、中、低剂量组。 1.2 两种药材的组成 加味茵陈五苓散由白背叶根30 g, 茵陈30 g, 泽泻15 g, 茯苓15 g, 猪苓15 g, 白术15 g, 珍珠草20 g, 黄花倒水莲15 g组成 (即茵陈五苓散原方去桂枝, 加白背叶根、黄花倒水莲、珍珠草组成。) 以上药材由广州中医药大学第一附属医院中药房提供;低、中、高剂量组药液每毫升含复方生药量分别为1.29 , 2.58, 5.16 g;五酯片, 广西方略药业有限公司生产, 批号 1.3 lysaccharide,lps 冻干卡介苗制剂 (Calmette Guerin bacillus vaccine, BCG) 购自中国生物技术集团公司上海生物制品研究所, 批号脂多糖 (1ipopo-lysaccharide, LPS) 为Sigma公司产品, 临用前用生理盐水稀释;丙氨酸氨基转移酶 (ALT) 测定试剂盒 , 批号天冬门氨酸氨基转移酶 (AST) 测定试剂盒, 批号丙二醛 (MDA) 测定试剂盒, 批号超氧化物歧化酶 (SOD) 测定试剂盒, 批号蛋白测定试剂盒 (考马斯亮蓝法) 测定试剂盒, 批号一氧化氮NO测试盒 (硝酸还原酶法) , 批号为南京建成生物工程研究所产品;TNF-α试剂盒为晶美公司产品, 批号 1.4 仪器、试剂与仪器 TDZ4-WS台式低速离心机, 长沙湘仪离心机仪器有限公司产品;Agilent 8453紫外分光光度计, 上海分析仪器厂产品;RT-2100酶标分析仪;电热恒温水浴锅:上海医疗器械五厂产品。 2 方法 2.1 两组的造模实验和给药剂量及剂量对五糖聚合酶张力的影响 参照文献, 并做适当修改。取雄性NIH小鼠90只, 体重 20～26 g, 随机分为 6组, 每组15只, 分别为正常对照组, 免疫性肝损伤模型组 (简称模型组) , 加味茵陈五苓散高、中、低剂量组和阳性对照组。模型组与治疗各组小鼠于实验1 d每只尾静脉注射BCG悬液约为2.96×107个活菌0.2ml, 从造模之日起治疗组和阳性对照组开始用药:治疗低、中、高剂量组小鼠分别按人体剂量的40, 20, 10倍灌服25.8, 51.6, 103.2 g/kg加味茵陈五苓散水煎液, 20 ml/kg, 阳性对照组按人体剂量的10倍灌服0.46 g/kg五酯片药液, 20 ml/kg, 正常对照组和模型组分别灌胃等容积的生理盐水。实验的第12天, 除空白组以生理盐水0.2 ml/20 g外, 其他各组以LPS 7 μg/20 g尾静脉注射。于静脉注射后10 h时, 摘取眼球取血1ml, 脱臼处死动物, 并迅速取出肝脏和脾脏称重, 计算脏器系数, 以3 000 r/min离心分离血清, 取肝脏左叶制备10%组织匀浆, 离心后取上清测定各项指标, 取肝脏右叶同一部位组织10%甲醛固定, 制作石蜡切片, HE染色做常规组织病理。 2.2 测试项目 2.2.1 血清酶活性测定 取分离后的血清0.2 ml, 按试剂盒所述方法测定血清中的ALT, AST (赖氏法) 。 2.2.2 肝、脾、胸腺器官系数的测定 剖取胸腺、肝脏和脾脏, 称重, 计算每 10g体重的脏器重量 (胸腺指数、肝指数和脾指数) 。