病毒感染的诊断与防治.ppt

病毒感染的诊断与防治;常用的病毒学诊断方法包括： 病毒的分离鉴定 病毒的血清学检查 病毒蛋白和核酸的检测;一、标本的采取与送检;二、病毒的分离与鉴定;2.鸡胚培养 鸡胚对多种病毒敏感。一般采用孵化9～14天的鸡胚，根据病毒种类不同，将病毒标本 接种于鸡胚的不同部位，最常用的鸡胚接种部位有：羊膜腔、尿囊腔、绒毛尿囊膜和卵黄囊等。 ;2020/11/3;2020/11/3;3.组织培养法 (tissueculture) 或细胞培养 (cellculture)法 是将离体活组织块或分散的组织细胞加以培养的技术总称，为病毒分离鉴定中的最常用的基本方法。 ;2020/11/3; 细胞的变化 有些病毒在细胞内增殖时可引起特有的细胞病变，称为细胞病变效应 (CPE)。常见的变化有细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等。 有些病毒如麻疹病毒、CMV、RSV等 作用于细胞膜，可使邻近的细胞相互融合，形成多核巨细胞或称融合细胞。 有些病毒 (如狂犬病病毒、麻疹病毒等) 可在培养细胞中形成胞浆或核内的包涵体。 ;2020/11/3;病毒培养时出现的CPE;2.红细胞吸附 (hemadsorption,HAd) 流感或副流感病毒等感染细胞后，由于细胞膜上出现了血凝素(haemagglutinin,HA)，具有吸附脊椎动物 (豚鼠、鸡、猴等) 红细胞的能力，这一现象称红细胞吸附，常用来测定具有HA的粘病毒与副粘病毒的增殖。若有相应的抗血清，则能中和细胞膜上的HA，HAd不再发生，称红细胞吸附抑制试验。;3.干扰现象(interference) 某些病毒感染细胞时不出现CPE或其他易于测出的变化(如HAd)，但能干扰在其后感染的另一病毒的增殖。如风疹病毒感染Vero细胞时CPE不明显，但它能干扰后感染的埃可病毒 (ECHOV) 的增殖，从而阻抑后者所特有的CPE。 ;4.细胞代谢的改变 病毒感染细胞的结果可使培养液的pH值改变，说明细胞的代谢在病毒感染后发生了变化。这种培养环境的生化改变也可作为判断病毒增殖的指标。;(二) 病毒的数量与感染性测定 ;2.50%组织细胞感染量 (TCID50)测定法 该方法是测定病毒能使50%的组织培养细胞发生感染的最小量。一般是将病毒悬液作10倍的系列稀释，分别接种细胞，经一定时间后观察CPE、血细胞吸附等指标，以最高稀释度能感染50%细胞的量为终点。最后用统计方??计算出50%组织细胞感染量（ 50%tissue culture infectious dose,TCID50)。;三、病毒感染的血清学诊断;1.中和试验(neutralizing test,NT test);2.补体结合试验 (complement fixation test,CF test);3.血凝抑制试验(hemagglutinatia inhibition test, HI test) ; 病毒 +鸡RBC = 凝集（血凝试验） 病毒 +特异性抗体 +鸡RBC=不凝集 （血凝抑制试验）;四、病毒感染的快速诊断;(一) 形态学检查;(二)病毒蛋白抗原检查 ;(三)特异性IgM抗体的检测 ;(四) 检测病毒核酸 ;基因芯片;第二节 病毒感染的预防;2.新型活疫苗 应用基因工程技术，控制病毒变异，或利用DNA重组技术，插入和定向缺失病毒基因，将保护性病毒蛋白的编码基因插入活载体中或选择性地去除病毒的某一个或几个致病基因而达到减毒作用制备的可在机体内增殖，诱发抗病毒免疫应答的疫苗。;(二)死疫苗(killed vaccine);4.基因工程疫苗(geneenginering vaccine)利用基因工程技术，分离、重组、转化和表达基因，制备出的能引起人体保护性免疫应答疫苗。 5. DNA疫苗 又称基因疫苗或核酸疫苗，这种核酸分子是一种细菌的质粒，在克隆了特异性的基因以后，能在真核细胞中表达蛋白质抗原，刺激机体产生特异性体液和细胞免疫 。 6.新型多价联合疫苗、口服疫苗的研究 ;减毒活疫苗与死疫苗优缺点比较;二、人工被动免疫;第三节 病毒感染的治疗;1.无环鸟苷 (acyclovir,ACV，阿昔洛韦)和丙氧鸟苷（ganciclovir GCV，庚昔洛韦）为鸟嘌呤或脱氧鸟嘌呤核苷类似物。 该药细胞毒性很小，是目前最有效的抗疱疹病毒药物之一。广泛用于疱疹病毒感染引起的单纯疱疹、生殖器疱疹及带状疱疹。 ;2.叠氮胸苷 (azidothymidine,AZT) 胸腺嘧啶核苷类似物，通过阻断前病毒DNA的合成而抑制HIV的复制，AZT对病毒逆转录酶的抑制比对细胞DNA多聚酶敏感100倍以上。可以有效地降低AIDS的发病率与病死率。耐药株的出现系由基因突变导致逆转