液相色谱的基础知识及应用详解演示文稿.pptVIP

液相色谱仪器结构组成示意图 流动相储液瓶 单元或多元泵 梯度混合器 预柱 手动-进样器 自动-进样器 保护柱 色谱柱 柱后反应器 柱温箱 检测器 馏分收集器 积分仪 工作站 计算机 接口 温度控制单元 样品制备单元 当前第31页\共有54页\编于星期日\5点 3. 样品分析方法开发 当前第32页\共有54页\编于星期日\5点 当前第33页\共有54页\编于星期日\5点 样品预处理 样品预处理的目的是为了纯化样品。 完成纯化的方法有: 稀释- 用一种互溶的且比流动相弱的溶剂或流动相本身稀释样品 过滤- 有不同孔径的过滤材料. 提示: 有的化合物可能吸附在过滤器上，从而影响定量. 离心- 可除去样品中的颗粒物质. 萃取-液液萃取，固相萃取 挥发- 采用惰性气体通过样品鼓泡或抽真空除去溶剂 样品准备 当前第34页\共有54页\编于星期日\5点 优化概览 优化应当是系统进行的，也就是说每个参数应当逐步变化. !!每次运行只改变一个参数!! 目标是在最短的分析时间内获得最好的分离结果. 优化溶剂强度 流速 温度 柱长 固定相* 优化 当前第35页\共有54页\编于星期日\5点 流动相的选择 流动相的选择原则是： ①样品易溶，且溶解度尽可能大。 ②化学性质稳定，不损坏柱子。 ③不妨碍检测器检测，紫外波长处无吸收。 ④粘度低，流动性好。 ⑤易于从其中回收样品。 ⑥无毒或低毒，易于操作。 ⑦易于制成高纯度，即色谱纯。 ⑧废液易处理，不污染环境。 反相色谱最常用的流动相及其冲洗强度如下： H2O＜甲醇＜乙腈＜乙醇＜丙醇＜异丙醇＜四氢呋喃 正相色谱常用的流动相及其冲洗强度的顺序是： 正己烷＜乙醚＜乙酸乙酯＜异丙醇 当前第36页\共有54页\编于星期日\5点 系统方法开发 ) 选择初始色谱柱 (直径, 长度, 填料粒度 ）- 4.6 x 250 mm, 5 ?m 使用适当的孔径 初始运行采用与流动相组成条件一致的pH ) 优化 k* (保留) 梯度范围, 时间, 斜率 流动相 - 很小变化 ) 优化回收率 样品的溶解性 温度的作用 键合相的作用 有机改性剂 ) 优化 ?* (选择性) 温度 键合相 pH (最后的手段) ) 优化 N (色谱柱条件) 流速 长度 填料粒度 当前第37页\共有54页\编于星期日\5点 分离度与 k’, N, 和 ? 的关系 初始 改变 k' 提高 N 提高 a 梯度范围, 斜率 流速, 填料粒度, 柱长 温度、流动相、pH 优化 当前第38页\共有54页\编于星期日\5点 State Key Laboratory of Chemical Resource Engineering 液相色谱的基础知识及应用详解演示文稿 当前第1页\共有54页\编于星期日\5点 （优选）液相色谱的基础知识及应用 当前第2页\共有54页\编于星期日\5点 1 液相色谱发展历史与分类 1.1 色谱的起源 (1903) Chromatography 色谱 M.S. Tswett 当前第3页\共有54页\编于星期日\5点 IUPAC definition of chromatography (1993) : Chromatography is a physical method of separation in which the components to be separated are distributed between two phases, one of which is stationary while the other moves in a definite direction. 固定相（stationary phase）：在色谱分离中固定不动、对样品产生保留的一相。 流动相（mobile phase）：带动样品向前移动的另一相。 色谱法：是一种物理化学分离方法，它利用不同组分与两相（固定相和流动相）之间的作用力（分配、吸附、离子交换等）的差别，样品在两相中做相对移动时，各组分在两相间进行多次平衡，使不同物质达到相互分离。 1.2 色谱的定义 当前第4页\共有54页\编于星期日\5点 1.3 色谱的发展历程 当前第5页\共有54页\编于星期日\5点 当前第6页\共有54页\编于星期日\5点 1.4 色谱中的分离过程 定性 定量 串联应用 样品纯化 成分分析 分离 当前第7页\共有54页\编于星期日\5点 色谱中的分离过程 咖啡 流动相 固定相 利用混合物中各组份在不同的两相中溶解、分配、吸附等化学作用性能的差异,当两相作相对运动时,使各组分在两相中反复多次受到