- 1、本文档共38页,可阅读全部内容。
- 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
查看更多
抗坏血酸诱导胰腺癌Panc.1细胞死亡方式及其机制 中山大学硕士学位论文
抗坏血酸诱导胰腺癌Panc.1细胞
死亡方式及其机制
中山大学中山医学院附属三院消化内科
硕士研究生: 宋薇
指导教师: 文卓夫副教授
中文摘要
胰腺癌(Pancreaticcarcinoma)近年来发病率在世界范围内呈明显上升趋势。
由于其早期诊断率低,恶性程度高,临床治疗棘手,五年生存率低,如何提高疗
效一直为人们所关注。研究发现多种肿瘤的发生发展与细胞增殖和死亡平衡失调
有关。因而,目前临床上治疗肿瘤所应用的许多手段如化疗、放疗、激素治疗、
热疗以及生物疗法等,其作用机制之一是诱发肿瘤细胞凋亡。因此,在肿瘤发生
发展过程中,如何实现人为地调控程序性细胞死亡的速率是当前肿瘤研究的一个
焦点。抗坏血酸(ascorbicacid,Asc),又称维生素C,是具有许多生物学功能
的水溶性葡萄糖类物质,因其安全、便宜,应用方便,且无明显毒副作用,故其
抗肿瘤作用的研究正在不断成为一个热门话题。体外培养细胞、动物实验等多项
研究【1、2、3~41已经证实抗坏血酸主要通过诱导肿瘤细胞凋亡来实现抑制肿瘤细胞
增殖的目的,其作用机制可能是降低细胞内过氧化物酶的浓度,导致细胞内活性
氧(ROS)生成增加,其中主要以生成H202为主,从而对肿瘤细胞产生杀伤作
用13,5,6,71,但同时又对正常细胞无明显影响。鉴于目前尚无体外实验研究抗坏血
酸对胰腺癌细胞的作用,故本文以胰腺癌PaIlc—l细胞株为试验对象设计此课
题,观察抗坏血酸干预对其产生的生物学效应,为ASC参与抑制胰腺癌细胞增
殖提供依据,并初步探究其作用机制,为治疗胰腺癌的新策略提供思路。
抗坏血酸诱导胰腺癌Pane.1细胞死亡方式及其机制 中山大学硕士学位论文
实验目的:
观察Asc对胰腺癌细胞死亡及增殖的影响;观察抗氧化剂及红细胞对Asc
介导的Panc一1细胞死亡的抑制作用,从而验证抗坏血酸是通过介导ROS产生诱
导Panc—l细胞发生胀亡从而抑制胰腺癌细胞增殖的理论假设。
实验方法:
采用MTT法观察Asc对胰腺癌Pane.1细胞增殖抑制作用,流式细胞技术检
测细胞增殖周期变化及凋亡率,光镜和透射电镜观察细胞形态学变化。为探讨
及红细胞预处理Pane.1细胞后再加入不同浓度Asc,进行电镜形态学观察;并利
用JC.1染色流式细胞仪检测Asc对Panc—l细胞线粒体膜电位的影响。
实验结果:
l、Asc在体外对胰腺癌Panc.1细胞有增殖抑制作用,将细胞周期阻滞在
G2/M期
结果表明随着Asc浓度的增加、作用时间的延长,Pane.1细胞存活率明显降低,
而在同等条件下对人正常肝细胞HL.7702则无明显抑制作用。PI染色流式细胞
仪检测结果提示Asc将Pane一1细胞阻滞在GE/M期,但未观察到凋亡峰出现。
2、Asc诱导胰腺癌Panc.1细胞发生胀亡性死亡
倒置显微镜及HE染色后光镜下观察到5mmol/L及以上浓度Asc可致Panc一1
细胞出现明显肿胀性坏死,但未见细胞凋亡。透射电镜显示,经Asc作用后Panc.1
细胞胞浆中有大量空泡形成,线粒体肿胀,嵴破坏,呈絮状改变;胞核肿胀,核
内染色质分散,符合最近提出的一种新型细胞死亡方式一胀亡性死亡的特征性改
变…01。
线粒体损伤有关,且红细胞能抑制这一作用的发生
mmol/L
流式细胞仪分析显示,经5、20 Asc作用24小时,与阴性对照组比
ll
抗坏血酸诱导胰腺癌Panc.1细胞死亡方式及其机制 中山大学硕士学位论文
较,Pane一1细胞线粒体膜电位明显降低,且有浓度依赖性。细胞外抗氧化剂
Catalase及红细胞预处理细胞能明显抑制细胞线粒体膜电位的下降,减轻细胞发
生胀亡的程度。
全文结论:
1、抗坏血酸在体外对胰腺癌Panc.1细胞有明显的增殖抑制作用,将细胞阻
滞在G2/M期。且与经典的细胞凋亡不同,抗坏血酸可诱导胰腺癌Pan
文档评论(0)