BCA法测蛋白培训.pptVIP

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BCA法测定蛋白浓度;【原理】:碱性条件下,蛋白将Cu2+复原为Cu+, Cu+与BCA试剂形成紫颜色的络合物,测定其在562nm处的吸收值,并与标准曲线比照,即可计算待测蛋白的浓度。 ;【主要特点】 1. 不受样品中离子型和非离子型去污剂影响。 2. 检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马氏亮蓝。 3. 快速:45分钟内完成测定。 4. 准确灵敏, 线性范围广。 5. 经济实用:在微孔板中进行测定,可大大节约样品和试剂用量。??;【实验器材与试剂】;【操作步骤】 1.配制BCA工作液: 根据标准品和样品数量,按50体积BCA试剂加1体积Cu试剂〔50:1〕配制适量BCA工作液,充分混匀。 2. 稀释标准品:用生理盐水稀释蛋白标准品BSA。;实验步骤;蛋白液稀释;5、按上表,将稀释好的A-G BSA标准品和待测蛋白样品〔原液,1:10,1:100稀释液〕各150 μl分别加到作好标记的试管中。推荐每个测定的样本做2-3个平行反响。 6、向每个试管中各参加3 ml BCA工作液,充分混匀,37℃水浴中孵育30分钟 ,将各管冷却至室温,须在3-5分钟内完成检测。 7、用分光光度计在562 nm处,测定每个样品及BSA标准品的吸光值,同时做好记录。 8、绘制标准曲线,计算样品中的蛋白浓度。;【本卷须知】: 1.标本的充分混匀。 2.要得到更为精确的蛋白浓度结果,每个蛋白样品均需做复孔, 每次均应做标准曲线 。 3.使用水浴箱温育时,应注意防止因水份蒸发影响检测结果。BCA法测定蛋白浓度;【原理】:碱性条件下,蛋白将Cu2+复原为Cu+, Cu+与BCA试剂形成紫颜色的络合物,测定其在562nm处的吸收值,并与标准曲线比照,即可计算待测蛋白的浓度。 ;【主要特点】 1. 不受样品中离子型和非离子型去污剂影响。 2. 检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马氏亮蓝。 3. 快速:45分钟内完成测定。 4. 准确灵敏, 线性范围广。 5. 经济实用:在微孔板中进行测定,可大大节约样品和试剂用量。??;【实验器材与试剂】;【操作步骤】 1.配制BCA工作液: 根据标准品和样品数量,按50体积BCA试剂加1体积Cu试剂〔50:1〕配制适量BCA工作液,充分混匀。 2. 稀释标准品:用生理盐水稀释蛋白标准品BSA。;实验步骤;蛋白液稀释;5、按上表,将稀释好的A-G BSA标准品和待测蛋白样品〔原液,1:10,1:100稀释液〕各150 μl分别加到作好标记的试管中。推荐每个测定的样本做2-3个平行反响。 6、向每个试管中各参加3 ml BCA工作液,充分混匀,37℃水浴中孵育30分钟 ,将各管冷却至室温,须在3-5分钟内完成检测。 7、用分光光度计在562 nm处,测定每个样品及BSA标准品的吸光值,同时做好记录。 8、绘制标准曲线,计算样品中的蛋白浓度。;【本卷须知】: 1.标本的充分混匀。 2.要得到更为精确的蛋白浓度结果,每个蛋白样品均需做复孔, 每次均应做标准曲线 。 3.使用水浴箱温育时,应注意防止因水份蒸发影响检测结果。

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