非禽源外源病毒检测课件---药典宣贯用(2012年1030).pptx

非禽源外源病毒检测;主要内容;外源病毒污染的主要来;1.2 生产原辅材料 指培养繁殖疫苗病毒所需的原辅材料，主要包括： 细胞（原代细胞、传代细胞，如PK15细胞污染PCV1） 鸡胚（如污染ALV、REV、CIAV等）;1.3 生产环境及操作过程造成污染 良好的生产环境和规范的操作程序是生产合 格产品的必要条件。生产企业实施GMP管理就是创造良 好生产条件的重要手段，也是生产生物制品的必要条件。 （如清场不彻底，空调系统故障，共用区域管理不规范等） 1.4 人为添加违规成分 如在疫苗中违规添加未经批准的流行毒株或不同血清型的毒株等。;外源病毒污染主要检查的材;3 2010年版《中国兽药典》非禽源外源病毒检验的新变化及关键点解析;“三个明确”;表1 不同非禽源细胞及其制品外源病毒检验法选用的细胞;中国兽医药品监察所;“三个调整”;3、调整了应选择的荧光抗体种类：;检验时需重点说明的几个问题;表2 常见疫苗样品处理方法;2、关于荧光抗体检查法的阳性对照病毒的选择问题 可采用FA或IFA方法，参考毒种和检测试剂请联系菌种保藏室。中监所目前提供可检测BVDV、CSFV、PPV三种病毒的3种IFA检测试剂盒 （200头份/盒，约可检10批疫苗）。;3、关于禽源材料制备的非禽用制品的外源病毒检测（如猪伪狂犬病毒活疫苗等） 按非禽源细胞及其制品外源病毒检验方法执行。 4．其它非禽源外源病毒检测方法的应用 研发单位在产品申报注册时，采用的其它方法进行的外源病毒检测，经农业部兽药评审委员会评定，认可通过的其它外源病毒检测方法，仍可作为该产品认可的外源病毒检测方法。如，猪伪狂犬病活疫苗（HB-98株）、水貂犬瘟热活疫苗等。;4 非禽源外源病毒检测实例展示;红细胞吸附性病毒;猪PPV感染PK15;CAV 红细胞吸附试验;4.2 致细胞病变检查法 4.2.1 常见细胞病变（CPE)特点： （1）细胞的折光率增强，形态逐渐变圆，感染细胞由局部感染扩展到整个单层，细胞死亡、脱落。如：肠道病毒、伪狂犬病毒等。 细胞聚集成丛，类似葡萄串状，细胞之间常有细丝状细胞间桥连接，细胞变圆或膨大。如大多数腺病毒。 细胞融合形成多核巨细胞，又称为合胞体。如副粘病毒。 胞浆中有空泡形成。如呼肠孤病毒、SV40等。;BVDV C24V株感染MDBK细胞CPE (右图,200X)和正常MDBK细胞对照(左图,200X;BVDV C24V株感染牛睾丸细胞CPE(右图，100X)和正常牛睾丸细胞(左图,100X);PRRS 病毒感染Mark 145细胞CPE (右图,100X)和正常Mark 145细胞对照(左图,100X）;4.2.2 合胞体（Syncytia）:是病毒感染后导致感染细胞及相邻细胞胞膜融合的产物，表现为若干细胞相邻的细胞膜消失，形成多核的巨细胞。融合形成的融合桥可允许病毒亚单位（核衣壳、核酸等）通过。如BRSV、IBRV等。;4.2.3 包涵体 ：细胞感染病毒后，出现于细胞浆和细胞核内的特殊结构。在光学显微镜下可见。多为圆形、卵圆形或不定形。一般是由完整的病毒颗粒或尚未装配的病毒亚基聚集而成；少数 则是宿主细胞对病毒感染的反应产物，不含病毒粒子。 有的位于细胞质中（如天花病毒包涵体） 有的位于细胞核中（如疱疹病毒） 或细胞质、细胞核中都有（如麻疹病毒） 有的还具有特殊名称，如天花病毒包涵体叫顾氏（Guarnieri）小体，狂犬病毒包涵体叫内基氏（Negri）小体。;包涵体观察;4.3 荧光抗体检查法;常见荧光素吸收波长及荧光颜色;猪瘟病毒间接免疫荧光（IFA）;PPV感染ST细胞72小时（左100X，右200X);BVDV间接免疫荧光（IFA);BVDV直接免疫荧光（FA);RV感染BHK21细胞;犬细小病毒GD/2011株感染F81细胞（FA）;BTV感染BHK21细胞;5 病毒室可提供的检验用标准物质和检测试剂;5.2;5.3 非禽源外源病毒检测荧光抗体试剂（新增加）;6 关于相关问题的回应;谢谢 恳请批评指正