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gc-ms法测定龙脑樟植物不同部位右旋龙脑的含量 龙脑樟（l.）是樟科拉齐亚樟属的一种化学类型。近年来，湖南省西部发现了一些樟属植物，主要包括天然的右旋龙脑（d-bonrol）。右旋龙脑又称为天然冰片,属于“芳香开窍类”中药,中医学认为龙脑为“芳香走窜”之品,内服有开窍醒神之效,适用于神昏、惊厥诸证;外用有清热止痛、防腐止痒之功,可治疗疮疡、肿痛、口疮等疾患。由于天然右旋龙脑的药用价值是合成龙脑无法比拟的,因而其需求量与日俱增,供需矛盾相当突出。可以预料,龙脑樟树的开发利用产业将具有一个乐观的市场前景。龙脑樟树被发现的时间不长,目前栽培的地方不多,由于它含有珍贵的天然右旋龙脑,因而越来越受到人们的青睐。利用龙脑樟进行工业化生产提取右旋龙脑成为迫切的需要。目前工业化生产主要是采用叶,其他部位的研究应用很少,为了进一步开发利用,探讨不同部位(鲜花、鲜枝、鲜皮、鲜叶、鲜叶阴干、干枝、干叶、落叶)挥发油“龙脑油”的含量。 因此,本实验对龙脑樟用水蒸气蒸馏方法提取,采用气质联用法测试分析,对右旋龙脑含量进行比较,为龙脑樟的综合利用以及工业化生产提取天然冰片提供实验依据。 1 龙脑樟对照品 GC-MS-QP2010型气质联用仪(日本岛津公司);Aoc-20i自动进样器,Edward E2M2.5真空泵,GCMSsolution工作站(日本岛津)。 天然冰片(d-龙脑)对照品(由中国药品生物制品检定所提供,批号111688-200501);龙脑樟样品采自湖南省浏阳市古港镇,在同一块地同一株龙脑樟植物采集鲜花、鲜枝、鲜枝皮、鲜叶、鲜叶阴干(室内通风处自然干燥)、干枝、干叶(低温干燥,干燥后100 g干叶相当于鲜叶200 g)、落叶,以上药材由湖南中医药大学药学院中药鉴定教研室刘塔斯教授鉴定;乙醚,丙酮,萘等试剂均为分析纯。 2 方法和结果 2.1 浸泡和蒸馏法 经过反复实验,采用以下方法进行提取:将以上样品剪碎,分别称取200.0 g,加水浸泡30 min,水蒸气蒸馏1 h。馏出液用乙醚萃取3次,合并萃取液,用无水硫酸钠干燥,过滤,回收乙醚,得到有特殊气味的白色晶体粗龙脑,密封待测。 2.2 溶液制备 2.2.1 对照溶液的制备 精密称取天然冰片(d-龙脑)对照品0.020 0 g,置5 mL量瓶内用丙酮定容,配成4.00 g·L-1的d-龙脑对照品溶液。 2.2.2 标准溶液的制备 精密称取萘1.112 2 g,置100 mL量瓶中用丙酮定容,得内标溶液。 2.2.3 供试品溶液的制备 分别称取2.1项下适量粗龙脑(约0.2 g)置10 mL量瓶中用丙酮定容,从中精密量取0.5 mL置5 mL量瓶中,加上述内标液0.5 mL,丙酮定容,得供试品溶液。 2.3 在铬条件下进行系统适用性试验 2.3.1 气候表及流速 Rtx-5ms色谱柱(0.25 mm×30 m,0.25 μm)。载气为高纯度氦气;程序升温,从80 ℃开始,以10 ℃·min-1升至120 ℃,并恒温4 min,再以20 ℃·min-1升至140 ℃;进样口温度250 ℃;流速1.00 mL·min-1;分流比30∶1。 2.3.2 条件2.4%乙醇提取溶剂 EI离子源;电子能量70 eV;离子源温度200 ℃;接口温度250 ℃;溶剂切除时间2.5 min;质量扫描范围40~400;采集方式 扫描;NIST05. LIB谱库。进样量1 μL。 2.3.3 适用性试验 分别吸取1 μL对照溶液、内标液与供试品溶液进样,测得对照品、内标物与供试样品各组分分离度良好;色谱图见图1。 2.4 组分保留时间和峰面积的测定 分别吸取上述对照品溶液(4.00 g·L-1)0.1, 0.2,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7 mL,分别加内标液(取5 mL稀释为10 mL)0.2 mL,用丙酮定容至1.00 mL,摇匀。分别进样1 μL,测定各组分的保留时间和峰面积。以d-龙脑的质量为Y,d-龙脑峰面积与内标物萘峰面积的比值为X,进行线性回归分析,得回归方程为Y=1.191 4X+0.087 6(r=0.999 9),d-龙脑在0.4~2.8 μg线性关系良好。 2.5 进样精密度试验 精密吸取2.3下的1.6 g·L-1浓度的对照品溶液,连续重复进样5次,进样量1 μL,测得d-龙脑峰面积比值的RSD 0.58%,结果表明精密度良好。 2.6 重复性试验结果 取同一批样品(干枝)5份,精密称定,按2.1和2.2.3项下方法操作制得供试品溶液,在相同条件下进行5次重复性试验,测得d-龙脑峰面积比值的RSD 1.0%。 2.7 稳定性测定 取同一批样品(鲜叶)精密称定,按2.1和2.2.3项下方法操作制得供试品溶液,分别于0,2,4,8 ,12 h测定,测得d-龙脑峰面积比值的RSD