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新菌株（乳酸菌）斜面培养法
1. 购买新菌株（安瓿瓶装冻干粉）
2. 菌种管开启方法一：按购买菌种上的说明进行操作即可。
3. 菌种管开启方法二（本次实验方法均在水平层流台进行）：
3.1 水平层流台开启风机跟紫外灯，半个小时
3.2 用浸过 75 ％酒精的脱脂棉擦净菌种管。
3.3 将菌种管顶端在火焰上加热，注意避免直接加热菌体或加热过度。
3.4 将无菌水滴至加热过的菌种管顶端，使玻璃开裂。
3.5 用锉刀或镊子敲下已开裂的菌种管的顶端。
4. 用玻璃三角瓶121.0℃灭菌约10-30ml的生理盐水20分钟
5. 将开封后的冻干粉倒入生理盐水中，摇匀
6. 用接种环沾取生理盐水，转接与MRS 培养基平板上，在36.5℃中恒温培养48-72 小时
后，得到二代菌。
7. 此时可以使用二代菌进行菌株扩大培养，或对其进行保存菌种。
注意事项：
1 菌种活化前，请将冻干菌种管冷藏保存在 5 ℃ -10 ℃ 环境下。
3 菌种经过冷冻干燥后，生长延迟期较长，需连续两次继代培养才能正常生长。
4 菌种活化及使用过程应做好安全防护工作。
第二代第 2 代)观察是否具有典型的菌落形态 ,然后挑取单一的纯菌落 ,进行革兰染色、镜
检 ,观察其染色特征及菌体形态 ,并进一步做生化鉴定实验以确定菌种。第三代为工作用菌。
乳酸菌菌种保存法
方法一：斜面保存法（略）
方法二：20%甘油保存法
器材：冻存盒、冻存管(2ml 装)、甘油 （丙三醇）、MRS 肉汤培养基、1ml 移液器及枪头、
酒精灯、 水平层流台、高压灭菌锅
操作步骤：
1. 在水平层流台中用接种环挑取所需保存的的菌株放于灭菌过的MRS 肉汤培养液，进行
36.5 ℃恒温培养48 小时
2. 配制40% 的甘油，用移液器移取0.5ml 于冻存管中，放于冻存盒
3. 用报纸将冻存盒包扎好，放于灭菌锅中灭菌（121.0℃、20Min）
4. 在水平层流台中，用移液器移取0.5ml 培养后的MRS 肉汤培养液加入到冻存管中，拧
紧盖子，摇匀，标识。
5. 在冻存盒外也做好操作人，日期，所保存的菌种等信息标记
6. 将冻存盒放于保鲜袋中，放入冰箱的冷冻室层进行保存，一般可以保存至两三年。
7. 若是需用，那一冻存管样进行培养即可。
实验室菌种激活方法
1. 配制少量的液体 MRS 培养液（约 50ml ），灭菌后，冷却后，在水平层流台里，倒
入一管冻存管菌种，摇匀，置于 36.5℃恒温培养一到两天，然后用此培养液划平板，
再从平板里挑单菌落，即可。
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