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不同产地阳春砂药材的指纹图谱比较研究 阳春沙是原料砂仁的一个常见品种，其来源是江科豆坤属于阳春沙。性温,具有化湿开胃,温脾止泻,理气安胎的功效,临床主治湿浊中阻,呕吐泄泻,妊娠恶阻等病症。阳春砂主产地为广东省阳春县,20世纪60年代末期引种至云南、广西等地,由于云南等地较好的生态条件,使砂仁果实形态大,产量较高,因此很快占领了砂仁的销售市场,据调查,目前市场销售的砂仁基本上都是云南、广西、福建等地引种栽培的阳春砂。而阳春砂在道地产区由于产量低等原因,市场占有比例较小,但这些引种地的商品在质量上与原产地商品是否有区别,值得进一步深入的研究。关于砂仁挥发油成分国内有过报道,其主要成分为醋酸龙脑酯、樟脑、冰片等,并对引种地的生态环境进行了探讨,但未见全面评价其质量的研究,尤其是砂仁的主流品种阳春砂。为此,笔者对阳春砂的指纹图谱进行了系统的研究,在此基础上对不同产地阳春砂进行了相关的图谱分析,为评价不同产地引种栽培的阳春砂质量提供客观的依据。 1 材料和方法 1.1 准药材的研究 10批地道药材阳春砂的果实,来源为广东省阳春市春湾镇规范化种植基地(GAP)样品,2002年8月采收,以此作为基准药材进行对照标准指纹图谱的研究;云南引种阳春砂为云南省药材公司中药所周俊雄老师提供4批;广西引种阳春砂为广西中药研究所赖茂祥教授提供3批;福建引种阳春砂3批为广东省阳春县张广富提供,均为2002年产。以上样品经笔者鉴定均为姜科阳春砂(Amomum villosumLour.)的干燥成熟果实,凭证标本存于广州中医药大学中药资源研究室。 1.2 化分离器设计 HP-5890型气相色谱仪,氢焰离子化检测器;醋酸龙脑酯对照品(迪马公司,纯度大于97%),甲醇(Merck公司,色谱纯),无水硫酸钠(分析纯)。 2 实验方法 2.1 气化室fid 色谱柱:HP-5柱(Crosslinked Mehyl siloxame,30 m×0.32 mm,0.25 μm);柱温:70℃,以10℃·min-1升至140℃;载气:N20.60 mL·min-1;分流比为50∶1;气化室:230℃;检测器(FID):300℃;进样量:1 μL。以醋酸龙脑酯的色谱峰为对照。 2.2 对照溶液的制备 取醋酸龙脑酯对照品,精密称定,加甲醇制成每1 mL含1.32 mg的溶液,作为标准溶液。 2.3 挥发油的提取 按中国药典2000年版(一部)附录XD甲法提取各样品的挥发油,取挥发油1.0 mL,加0.2 g无水硫酸钠,振摇,静置过夜,精密量取脱水后的挥发油0.1 mL,置2 mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得。 2.4 测量 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1 μL,注入气相色谱仪,以标准品醋酸龙脑酯为参照物,测定并记录色谱图。 2.5 程序升温的方法 分别考察了极性柱和非极性柱,柱温60,70,90℃和程序升温等条件,结果以非极性柱和程序升温的方法较为理想,色谱峰形较好,且较稳定,样品在30 min内可使全部色谱峰流出,且大部分得到基线分离。为了考察分析方法的可靠性,以春湾镇GAP规范化种植基地样品为例,对其稳定性、仪器精密度、实验方法重复性作了相应的考察,结果证明稳定性及重复性良好。 2.5.1 色谱峰保留时间的确定 取同1份供试品溶液,分别在0,1,2,4,8,12,24,36,48 h不同时间点进行检测,考察色谱峰保留时间的一致性,各主要色谱峰保留时间的RSD分别为0.3%～1.5%。 2.5.2 仪器准确度测试 取同1份供试品溶液,连续进样5次,考察色谱峰保留时间的一致性,各色谱峰保留时间的RSD均低于3%。 2.5.3 指纹图谱技术的验证 取同1 批号样品5份,同法检测,考察色谱峰保留时间的一致性,各色谱峰保留时间的RSD均低于3%,符合指纹图谱技术的要求。直观观察叠加的色谱图,也可判断峰位有良好的重合。 3 结果 3.1 指纹区基本特征 阳春砂GC指纹图谱中可分离出30个左右主要峰,经比较10批规范化种植基地样品所有的记录和测定的色谱图后,从中选定9个共有峰作为可以构成阳春砂指纹图谱的稳定的特征峰,标准指纹图谱见图1。为易于辨认和分析,指纹图谱可分为3个区:保留时间0～10 min(Ⅰ区),出现4个特征峰,均达到基线分离,其主要特征峰为1,2,3,4号;保留时间10～20min(Ⅱ区),出现5个主要特征峰,均达到基线分离,其主要特征峰为5,6,7,8,9。最强峰为9号,其次为7,5,8,2,相对峰面积比值为2∶5∶7∶8∶9=0.02～0.08∶0.02～0.11∶0.13～0.84∶0.02～0.08∶1。单峰面积占总峰面积大于50%的共有峰为9号峰。单峰面积占总峰面积大于或等于10%的共有峰为7号峰;保留时间20～30 min(Ⅲ区),主要为一些细小的指