细胞工程的理论基础.pptVIP

第三章 细胞工程的理论基础; 细胞培育(cell culture)技术 即是选用各种细胞的最佳生存条件对活细胞进行培育和讨论的技术，是广泛应用于生命科学等讨论领域的重要技术。 ;动物细胞与组织培育（cell and tissue culture）是动物细胞工程的重要技术基础。 动物的细胞与组织培育是指从活的机体中取出组织或细胞，模拟机体内生理条件，在体外建立无菌、适温和肯定营养条件等，使之生长和生存，并维持其结构和功能的技术。;组织培育的概念 组织培育这一名词实际上是一个通用名词，习惯上泛指全部的体外培育。依据培育物的不同可概括为三个不同概念：细胞培育、组织培育和器官培育。;A：细胞培育：将组织块用机械方法或酶解法分离成单个细胞，做成细胞悬液，再培育于固体基质上，成单层细胞生长，或在培育液中呈悬浮状态培育的技术称为细胞培育。;B：组织培育：将活体的一小片组织放在盛有培育液的玻璃或塑料培育器皿中，待组织块粘着后，沿底面平面移动生长的过程称为组织培育。 从组织块中生长出来的仍然是细胞，细胞在生长的同时也发生移动，至使组织培育难以长时间维持其原有结构，结果也就成了细胞培育。;C：器官培育：是指实行某些措施使器官的原基、器官的一部分或整个器官在体外存活、生长，并保持其原有结构和功能的培育技术。;体外培育的种类;二、 细胞培育的现实意义; ;三、细胞培育的优点;; ;3. 讨论的样本可以达到比较均一性 通过细胞培育肯定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采纳克隆化等方法使细胞达到纯化。;4. 讨论内容便于观察、检测和记录 采纳各种讨论技术、记录方法：  讨论: 倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原 位杂交、同位素标记-- 记录: 摄影照片、缩时电影、电视--;5.讨论的范围比较广泛 学科多： 细胞学、免疫学、肿瘤学、生物化学、遗传学、分子生物学等 对象广： 各种动物：低等动物--高等动物--人类 一种动物：不同???龄-- 不同组织-- 正常或特别（肿瘤--）;6.讨论的费用相对较经济 可供应大量、同一时期、重复性好的、生物学性状相像的实验对象。;四、细胞培育的缺点; 现人工模拟体内环境的技术已经很高,  但, 人工所模拟的条件与体内实际情况 仍不完全相同. 当细胞被置于体外培育后, 生活在缺乏动态平衡的环境中, 久了，必定发生变化.; 因此，对于体外培育的细胞，应该把他们视作一种既能保持动物体内原细胞肯定的性状、结构和功能，又具有某些转变的，特定的细胞群体，而不能将之与体内的细胞完全等同。;五、细胞培育的工作原则;有标准化的工作方法 培育用的液体极多（如培育液、胰蛋白酶、HANKS液及 抗菌素等），应由专人负责，并保证做到按规程行事，配制浓度精准，灭菌牢靠，全部配好的溶液瓶上都要标明名称、浓度、消毒与否和制备日期等。 一切培育用品都要有固定的存放点，避开杂乱无章，其中尤其重要的是：培育用品与非培育用品应严格分开，已消毒品与未消毒品应分别存放。 ;其次节 组织培育的细胞生物学;一、体内外细胞的差异和分化;;1.与体内主要不同： 相对孤立、相对单一 缺乏体内的系统作用、失去神经体液的调节 和细胞相互间的影响 ;2. 主要表现 失去原有组织结构和细胞形态 分化减弱或不显 细胞趋向单一化； 3. 提示 要正确熟识体外培育细胞 是一种特定条件下生长的细胞群体。;（二）培养细胞的 分化;;二、培育细胞形态分类;体外细胞培育物的生长类型 ;体外培育细胞的分型 ;贴附(粘附)型细胞 ;培育时：这些细胞被放到体外环境中以后,同样需要粘附于某一固相表面才能生存和生长，因而属于粘附型细胞。 粘附(锚定或锚着)依靠型(性)细胞：唯有粘附于固相表面才能生存的细胞; 类型 细胞在体内、外的粘附方式：存在差异 体内：粘附是全方位 外形具有简洁的立体特征 体外：多数情况，细胞只有一个附着平面 外形一般与体内时明显不同 依据培育细胞粘附生长时的主要形态，可分为几大类型 ;分类 依据形态大致的不同，主要2类： 上皮细胞型 成纤维细胞型 其它，不定型 ;上皮细胞型 ;生长特点 易相连成片 相靠—紧密相连—成薄层------铺石状