年苏教版生物选修全册精品课件四二.ppt

(1)加热使DNA双链间的________键完全打开，称为________；而在细胞中是在________酶的作用下进行的。 (2)如果只需要大量克隆模板DNA中间的某个特定区段，应该加入________种特定的引物。当温度降低至56 ℃时，引物与两条“伸展”的模板的特定位置结合，在DNA聚合酶的作用下，只能在引物的________端连接脱氧核苷酸，两条子链的延长方向都是___________________。 (3)PCR技术的必需条件，除了模板、原料、酶之外，至少还有三个条件，即液体环境、适宜的________和________，前者由________自动调控，后者则靠________来维持。 (4)通过PCR技术使DNA分子大量复制，如果将一个用15N标记的DNA分子放入试管中，以14N标记的脱氧核苷酸为原料，连续复制四次之后，则15N标记的DNA分子占全部DNA分子总数的比例是________。 【解析】　(1)PCR技术利用热变性原理使DNA双链之间的氢键断裂，称为变性，而在细胞内是在解旋酶的作用下使氢键断裂。(2)PCR分为三个基本反应步骤：变性(94 ℃)、退火(40 ℃～60 ℃)、延长(72 ℃)，其特异性依靠于与靶序列互补的引物，引物是两段与待扩增DNA序列互补的片段，两引物之间的距离决定扩增片段的长度。由于DNA聚合酶不能从头开头合成DNA，只能从引物的3′ 栏目导引 新知初探 思维启动 要点突破 讲练互动 知能演练 轻巧夺冠 实验探究 专项突破 第四章　生物化学与分子生物学技术实践 其次节　分子生物学技术 学习导航 1.尝试PCR(DNA聚合酶链式反应)技术的基本操作。 (重难点) 2．体验PCR这一常规分子生物学实验方法。(难点) 3．理解PCR的原理，商量PCR技术的应用。(重点) 新知初探?思维启动 生物转化环节 DNA重组 工程菌 2.原核生物、真核生物的细胞已被用于大批 量生产__________、_________等外源蛋白；植物和动物也可以作为天然的 _____________，用于生产新的或改造过的基因产物。DNA重组技术还大大简化了新药的开发和检测系统。 胰岛素 干扰素 生物反应器 (1)工程菌是指用DNA重组技术的方法使外源基因得到高效表达的菌类细胞株系。(√) (2)克隆羊“多利”是分子生物学的进展的成果。(×) 判一判 二、PCR技术(聚合酶链式反应) 1.PCR技术的含义 在体外快速扩增_______________或DNA序列(目的DNA片段)的实验技术，又称为聚合酶链式反应。 2.PCR技术的原理 (1)条件：DNA模板、____________、_____、4种脱氧核苷酸。 特定基因 DNA聚合酶 引物 (2)PCR扩增的特点：_______、简便和 ________。 (3)进行PCR的先决条件：待扩增的DNA片段___________________要为已知。 (4)引物序列确定的依据是：被扩增区域的3′端边界DNA序列。 快速 灵敏 3′端核苷酸序列 1．在PCR反应中与解旋酶作用相同的操作是什么？ 提示：生物体外，利用DNA的热变性原理：94 ℃时DNA的双螺旋结构将解体，双链分开。 想一想 三、PCR扩增的过程 1.物质条件(反应成分) (1)引物：两种_____________，每种由15～40个核苷酸聚合而成。 (2)反应物：4种______________(dATP、dGTP、dCTP、dTTP)。 (3)DNA聚合酶：常用的DNA聚合酶是从一种嗜热菌中分离得到的______________。 寡核苷酸 脱氧核苷酸 Taq聚合酶 (4)模板DNA：既可来源于动物、植物、微生 物，也可来源于人工合成。 (5)Mg2＋：供应DNA聚合反应的离子条件。 (6)_____________ ：供应反应的溶液体系。 2.PCR扩增过程 变性→退火→延长 (1)变性：在94 ℃高温下作为模板的双链DNA_________成为单链DNA。 反应缓冲液 解旋 (2)退火：反应体系的温度降至40～60 ℃，使得________与作为模板的单链DNA上特定部位相互配对、结合。 (3)延长：反应体系的温度回升到72 ℃左右，在单链上4种脱氧核苷酸依据______________的原则连接在引物之后，使引物链延长，形成互补的______________。 引物 碱基互补配对 DNA双链 想一想 2．某考古学家在冰中发现了一种已经灭亡的巨型动物的肌肉，实行什么方法可以推断该动物与现今大象的DNA相像？ 提示：用PCR技术扩增该动物的DNA，与大象的DNA进行比较。 要点突破?讲练互动 要点一 PCR体外扩增DNA与生物体内DNA复制的比较 体内复制 PCR反应 不同点 解旋 在解旋酶