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对自身EGFP进行抑制的质粒载体PE-SIEGFP的设计与构建
摘要
【目的】通过对自身EGFP进行抑制的质粒载体PE-SIEGFP的设计与构建,为后面将哺乳动物表达系统高效地运用于基因工程奠定基础。
【方法】首先,利用PCR技术从已构建好的siRNA表达质粒上扩增shRNA SIEGFP基因的表达框,并通过琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物。然后,用MIU1酶对PE-C1载体的MIU1位点进行单酶切,并将线性化的PE-C1载体质粒与凝胶回收后的shRNA SIEGFP基因表达框进行同源重组连接,转化入大肠杆菌,筛选出阳性克隆后提取质粒并进行质粒PCR检测和测序鉴定。最后,对构建好的并且测序比对成功
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