对自身EGFP进行抑制的质粒载体PE-SIEGFP的设计与构建.docx

对自身EGFP进行抑制的质粒载体PE-SIEGFP的设计与构建 摘要 【目的】通过对自身EGFP进行抑制的质粒载体PE-SIEGFP的设计与构建，为后面将哺乳动物表达系统高效地运用于基因工程奠定基础。 【方法】首先，利用PCR技术从已构建好的siRNA表达质粒上扩增shRNA SIEGFP基因的表达框，并通过琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物。然后，用MIU1酶对PE-C1载体的MIU1位点进行单酶切，并将线性化的PE-C1载体质粒与凝胶回收后的shRNA SIEGFP基因表达框进行同源重组连接，转化入大肠杆菌，筛选出阳性克隆后提取质粒并进行质粒PCR检测和测序鉴定。最后，对构建好的并且测序比对成功