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固相萃取-高效液相色谱-荧光法测定面包中的苯并a 苯并（a）（bap）是一种常见的高活性间接中毒。苯并(a)芘(Ba P)通过食物链在鱼类、植物和软体动物中发生生物蓄积,造成食物污染。方便面是指通过对面条进行蒸煮、油炸等工艺制得,再佐以油酱、菜肉、粉料等调料包,经过简单冲泡即可食用的即食食品。方便面原料受到污染或者不适当的油炸可能使方便面中的Ba P含量升高,2012年10月知名方便面品牌农心在韩国生产的6款方便面被卷入致癌物苯并(a)芘风波,消息引起各界高度关注。在食品苯并(a)芘的检测中,根据检测对象、富集提取方式的不同,使用的分析方法也不相同,主要有薄层层析法、荧光分光光度法、气相色谱法、气相色谱质谱法、高效液相色谱紫外法、高效液相色谱荧光法,其中荧光法灵敏度高,重现性好,是较常用的方法。目前,我国检测食品中苯并(a)芘的标准方法主要有GB/T5009.27,GB/T22509,NY/T1666,SC/T3041等,这些方法通常存在样品处理复杂、耗费试剂量大、检测周期长等局限性。本实验根据方便面中不同的食品材质,分别对方便面中的油酱料包,粉料、菜肉包和面饼采取不同的预处理方案,再用高效液相色谱荧光检测法进行检测,旨在建立一种试剂用量少、分离效果好、简便快速的方便面中苯并(a)芘的检测方法。本文采用Hi Capt-Benzo苯并(a)芘专用固相萃取柱对基质较为复杂的方便面样品进行净化处理,有效排除基质干扰,再用高效液相色谱—荧光检测器(HPLC-FLD)测定,灵敏度高,重现性好,有利于方便面中苯并(a)芘的准确快速的定性定量分析。 1 材料和方法 1.1 仪器、试剂和仪器 苯并(a)芘标准品中国计量科学研究院标物中心;Hi Capt-Benzo苯并(a)芘专用柱维泰克科技有限公司;乙腈色谱纯;水超纯水,正己烷,丙酮,乙酸乙酯,异丙醇分析纯。 Agilent1200高效液相色谱仪配荧光检测器、Agilent SB-C18(4.6×250mm,5μm)色谱柱;TGL-16M离心机长沙湘仪离心机仪器有限公司;高速分散机IKA T18;涡旋混合器Vortex-Genie 2;加压固相萃取装置美国J2 scientific公司;N-EVAP111氮吹仪美国仪器集团;BP112s天平赛多利斯仪器系统有限公司。 1.2 实验方法 1.2.1 提取试剂、测定总苯并a 正己烷、丙酮、乙酸乙酯、异丙醇分别进行重蒸,然后分别量取重蒸后的正己烷41.4m L、丙酮8m L和乙酸乙酯0.6m L混合后转移入旋转蒸发瓶中蒸发至近干,然后再用氮气吹干,最后用0.2m L重蒸后异丙醇溶解,在液相荧光条件下检不出苯并(a)芘为合格(注:以下实验所使用试剂皆为重蒸处理后试剂,乙腈和水除外)。 1.2.2 提取过程 1.2.2. g/l正己烷溶液 40℃水浴溶解酱料包中的油脂,然后准确称取0.4g(精确到0.0001g)左右样品置于5m L试管中,然后用后正己烷2m L涡旋溶解,等待净化。 1.2.2. 旋转蒸发器浓缩法 准确称取初步粉碎的样品2g(精确到0.01g)左右置于50m L离心管中,加入2g无水硫酸钠,加入15m L正己烷,匀浆处理2min,超声提取5min,6000r/min离心2min,收集上清液置于50m L旋转蒸发瓶中,然后再加入10m L正己烷溶解残渣,重复上述过程两次,合并正己烷提取液,用旋转蒸发器40℃浓缩到1m L左右,转移浓缩液到5m L试管中,用0.5m L正己烷淋洗蒸发瓶,合并溶液,然后用正己烷定容到2m L,等待净化。 1.2.3 样品的淋洗和解吸 在Hi Capt-Benzo柱中依次加入5m L丙酮,2m L正己烷活化。在柱中正己烷液面为2mm时上样,将1.2.2.1和1.2.2.2得到的待净化液加入Hi Capt-Benzo柱中,此过程注意不要使柱干涸,再用200μL正己烷淋洗样品管,一并加入SPE柱中,流出液弃去。待上样液完全流出后,用3m L的乙酸乙酯∶正己烷=1∶4(V/V)溶液淋洗,淋洗液弃去,将SPE柱吹干。然后用3m L丙酮解吸,收集解吸液。解吸液40℃下用氮气吹干,加入异丙醇200μL溶解并定容,待液相色谱荧光检测。 1.2.4 流动相、柱温度 检测条件:色谱柱:Agilent SB-C18柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相:乙腈∶水=88∶12(V/V);流速:1.0m L;柱温:30℃;进样量:20μL;荧光检测器:激发波长384nm,发射波长406nm。 2 结果与讨论 2.1 清除试剂中苯并a的干扰 在富含多环芳烃的石油和煤工业产品中不可避免的存在苯并(a)芘(图1),检测苯并(a)芘中使用的大部分试剂都是石油和煤工业的产品,如何清除试剂中苯并(a)芘对检测的干扰是一个必须要解决的问题,