大肠杆菌基因组DNA的提取及荧光定量PCR试验设计.docx

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2023-08-27 发布于内蒙古
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大肠杆菌基因组DNA的提取及荧光定量PCR试验设计.docx

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大肠杆菌基因组 DNA 得提取一、传统法提取大肠杆菌基因组 DNA。 1、实验原理提取 DNA 得一般过程就是将分散好得组织细胞在含十二烷基硫酸钠(SDS) 与蛋白酶K得溶液中消化分解蛋白质,再用酚与氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质,得到得 DNA 溶液经乙醇沉淀使DNA 从溶液中析出。 SDS 得作用机理就是由于其能结合蛋白, 中与蛋白得电性,使蛋白质得非共价键受到破坏,失去二级结构,从而变形失活,蛋白酶 K 或链霉蛋白酶E均为光谱蛋白酶,其重要特性就是能在SDS 与EDTA(乙二胺四乙酸二钠)存在得情况下保持很高得活性。在匀浆后提取 DNA 得反应体系中,SDS 可通过失活蛋白破坏