水产动物饲料中粗蛋白质的测定.pptx

饲料中粗蛋白的测定注意事项;凯氏烧瓶洗涤干净，1050C烘箱中烘干（1小时）;天平的准备： 接通电源，预热20分钟;凯氏烧瓶横置，小心将样品倒入凯氏烧瓶底部。;⑷再将凯氏烧瓶横置，水平移出长纸条时，样品洒落。;冷凝水的开启。冷凝水要在蒸馏开始时开启,如果蒸馏一段时间发现未开启蒸馏水,要先停止加热,待冷凝装置冷却后再开通冷凝水,以防爆炸。 ;系统密闭性检查。整个蒸馏装置所有接口应该密封完全,不能漏气,蒸馏实际样品前先做回收率,以确定系统密闭性,蒸馏步骤以及试剂是否有误。 ;加入硫酸时，勿使硫酸外滴到他处，注意安全。;消煮;消煮;试样消煮液的转移时，每次尽量倒入漏斗中央，少沾内壁。最后凯氏烧瓶紧靠漏斗内壁，以免最后一滴顺着凯氏烧瓶的外壁流出。使结果偏低。;滴定终点：灰红色;饲料中粗蛋白质的测定 （凯氏定氮法）;一、适用范围;二、原理;三、试剂;混合催化剂：; 混合指示剂; 盐酸标准溶液; 硼酸; NaOH; 蒸馏水;四、主要仪器设备;（二）消煮炉;（三）酸式滴定管;（四）锥形瓶：150ml（2个）;（五）容量瓶：100ml(2个);（六）凯氏烧瓶;（七）移液管、刻度吸管;（八）量杯;（九）消煮架;（十）通风橱;（十一）半微量凯氏蒸馏装置;（十二）称样纸;（十三）药勺、洗瓶;五、试样的选取与制备;（一）样品的称量;样品;称样; ⑶凯氏烧瓶横置 小心将盛有样品的长纸条放入凯氏烧瓶中，凯氏烧瓶竖立，样品倒入凯氏烧瓶底部。;⑷再将凯氏烧瓶横置，水平移出长纸条，放入天平回称纸重。;记录： ⑴称样纸+样品重（m1） 1号：0.8835g 2号：0.9112g（ 取四位小数） ⑵回称纸重（m2） 1号：0.5833g 2号：0.5842g（取四位小数） ⑶计算试样质量（m） m= m1 —m2 1号：0.3002g 2号： 0.3270g （取四位小数）;（三）加入混合催化剂;混合催化剂放入凯氏烧瓶中：;（四）加入硫酸;（五）消煮;电炉加热： 开始小火，待样品焦化泡沫消失，再加强火力(酸雾在颈部2/3处泠凝)直至呈透明的蓝绿色，再继续加热2h。消煮过程中要不断转动凯氏烧瓶，以使焦化的样品浸入硫酸溶液加速消煮过程。 消煮过程溶液颜色的变??： 黑色→深褐色→浅褐色→黄色→黄绿色→蓝绿色→蓝色;（六）试样消煮液的转移与定容; 用蒸馏水稀释到容量瓶容积的2/3时，将容量瓶直立旋摇，稀释至标线时，等候1~2分钟，控制洗瓶逐滴加水至刻度处，摇均备用。;（七）蒸馏装置的洗涤;蒸馏装置的洗涤;（八）蒸馏;1.蒸馏装置的准备;;用移液管（漂洗3次）准确移取10毫升试样液，从玻璃杯入口处放入反应内室中，用少量蒸馏水（10ml左右）冲洗入口，洗液入反应室，塞好玻璃塞。 ;加试样液：准确移取10毫升试样液，从玻璃杯入口处放入反应内室，用少量蒸馏水（10ml左右）冲洗入口;用量杯量取１０毫升氢氧化钠溶液，加至入口处，小心提起玻璃塞，使之快速流入反应室，迅速塞好玻璃塞，在入口处加水密封。 ;5. 在入口处加水冲洗并密封：　 总液体不超过反应室1/3;打开进气管，进入蒸汽加热，然后夹住排废液管。蒸汽进入反应室使液体沸腾。（注意：不超过反应室）;7.夹住排废液管;硼酸溶液吸收氨液由红色变为蓝色，计时，蒸馏四分钟，降低锥形瓶，使冷凝管末端离开硼酸液面，再蒸馏１分钟，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液流入锥形瓶，蒸馏结束。 排除废液并冲洗。;反应室液体沸腾。（注意：不超过反应室）　硼酸溶液吸收氨液由红色变为蓝色;降低锥形瓶，使冷凝管末端离开硼酸液面，再蒸馏１分钟，蒸馏水冲洗冷凝管末端。;（九）滴定;1.酸式滴定管的准备;记录初读数（两位小数） 1号 0.05 ml 2号 0.20 ml （两位小数） 用标准盐酸溶液滴定锥形瓶里的硼酸溶液，边滴边摇，由蓝色变为灰红色为滴定终点。 记录终读数（两位小数） 1号 10.20ml 2号 11.35ml （两位小数）;滴 定;3. 滴定终点：灰红色;计算盐酸标准溶液用量： V2=初读数-终读数 1号： V1-2=10.20-0.05=10.15(ml) 2号： V2-2=11.35-0.20=11.15(ml);七、空白测定;八、结果计算;0.0140：每毫升lmol /L盐酸标准溶液相当于0.0140g的氮 6.25：氮换算成蛋白质的平均系数;重复性：试样取两个平行样其算术平均值为结果。 试样粗蛋白含量在25%以上，允许相对偏差为1% 试样粗蛋白含量在10-25%之间，允许相对偏差为2% 试样粗蛋白含量在10%以下时，允许相对偏差为3% 相对偏差=│测定值