第九章菌种保藏与专利保护.ppt

第九章 菌种保藏与专利保护 一、菌种的退化与防治措施 二、菌种的复壮 三、菌种的保藏 一、菌种的退化与防治措施 1.菌种退化：菌种在培养或保藏过程中，由于自发突 变的存在，出现某些原有优良生产性状的劣化、遗传 标记的丢失等现象，称为菌种的衰退或退化。 2、菌种退化的现象： （1）菌落和细胞形态的改变； （2）生长速度缓慢，产孢子越来越少； （3）代谢产物生产能力或其对宿主寄生能力下降； （4）抵抗力、抗不良环境能力减弱等。 3、菌种退化的原因 （1）基因负突变； （2）与培养条件有关，如：理化因子影响。 4、防止菌种退化的措施 （1）防止基因自发突变：控制理化因子。 （2）防止退化细胞在群体中占优势： 控制传代的次数（一般在DNA的复制过程中，碱基的错配率 是5x10-4，自发突变的频率为10-8~10-9，采用良好的菌种保 藏方法，可以减少移种和传代的次数） 单细胞分离纯化： 选择合适的培养条件： 防止诱变处理后的退化： 二、 菌种的复壮 使衰退的菌种恢复原来优良性状。 狭义的复壮是指在菌种已发生衰退的情况下，通过纯种分离和生 产性能测定等方法，从衰退的群体中找出未衰退的个体，以 达到恢复该菌原有典型性状的措施； 广义的复壮是指在菌种的生产性能未衰退前就有意识的经常、进 行纯种的分离和生产性能测定工作，以期菌种的生产性能逐 步提高。实际上是利用自发突变（正变）不断地从生产中选 种。 菌种的复壮措施 纯种分离 菌落纯的分离方法：平板表面涂布法，平板划线分离法， 　　　　　　　　　　琼脂培养基浇注法。 细胞纯的分离方法：分离小室进行单细胞分离，显微操纵 　　　　　　　　　　器进行单细胞分离，菌丝尖端切割法 　　　　　　　　　　进行单细胞分离。 通过宿主体内生长进行复壮（如苏云金杆菌Bacillus thuringiensis的复壮） 淘汰已衰退的个体：采用比较激烈的理化条件进行处理， 　　　　　　　　　　以杀死生命力较差的已衰退个体。 三、菌种的保藏 （一）菌种保藏的原理 挑选典型菌种的优良纯种 一般采用微生物的休眠体（如孢子、芽孢等） 创造适于微生物长时期休眠的环境条件　 　如：干燥、低温、缺氧、避光、缺乏营养以及添加保 　　　护剂或酸碱中和剂等。 ③干燥保藏法 将菌种置于土壤、细纱、滤纸、硅胶等干燥材料 上保藏。如砂土管法，适用于放线菌、芽孢菌和某 些真菌保藏，保藏时间几至几十年。 （三）几种常用菌种保藏方法的比较 （四）主要菌种保藏机构 P216 菌种保藏机构的任务：广泛收集科研和生产菌 　　　　　　种、菌株，并加以妥善保管，使之达到不 　　　　　　死、不衰、不乱以及便于研究、交换和使 　　　　　　用的目的。 菌种保藏机构： 中国微生物菌种保藏委员会(CCCCM) 美国的典型菌种保藏中心(ATCC) 英国国家典型菌种保藏所（NCTC） 法国里昂巴斯德研究所（IPL） * * 菌 连续在培养基上（内）移种 种 生活态 传代培养保藏法 连续在活宿主上（内）移种 保 固体斜面 藏 湿法 半固体琼脂柱 方 休眠态 液体介质（蒸馏水、糖液、其它溶液） 法 干法 藏在玻璃管内 （砂土管） 吸附在合适的载体上 （二）菌种保藏的方法 常用菌种保藏的方法①低温保藏法方法：菌种管置4℃冰箱保藏，定时传代 原理：低温下，微生物代谢强度明显下降 。 ②石蜡油低温保藏法： 橡皮塞取代棉塞、加石蜡油。 ④真空冷冻干燥法 加有保护剂的菌悬液在冻结状态下予以真空干燥。 适用于各种微生物，便于大量保藏，菌种存活时间长，是目前最好的保藏方法之一。 ⑤液氮超低温保