DNA重组技术的基本工具.pptVIP

专题1 基因工程 §1-1 DNA重组技术的基本工具 导：基因工程培育抗虫棉的简要过程： 苏云金芽孢杆菌 提取 抗虫基因 普通棉花(无抗虫特性) 棉花细胞(含抗虫基因) 与载体DNA拼接，导入 棉花植株(有抗虫特性) 表达 解决培育抗虫棉的关键步骤需要哪些工具？ “分子手术刀”—— 限制性核酸内切酶 “分子缝合针”—— DNA连接酶 “分子运输车”—— 基因进入受体细胞的载体 §1-1 DNA重组技术的基本工具 “分子手术刀” ──限制酶 “分子缝合针” ──DNA连接酶 “分子运输车” ──基因进入受体细胞的载体 思 1.自主学习书本4--6页的书本知识 2.完成本节的自学环节。 3.思考讨论题。 议——展 1①在切割含目的基因的DNA分子时，限制酶切割几个磷酸二酯键，为什么？ ②要获得相同的黏性末端，一定要使用同一种限制酶切割吗？ (3)限制酶所识别的序列有什么特点？ 2.DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗？为什么？ 3.想一想需具备哪些条件才能充当“分子运输车”？ 评 限制性核酸内切酶的特点及作用 每种限制性核酸内切酶只能识别特定的核苷酸序列，并在特定位点上切割DNA 分子。 ——特异性 TGATGGAATCTCG AATTCAGTCT ACTACCTTAGAGCTTAA GTCAGA ACGATGGATTTAGGG CCCTTCTCCCCA TGCTACCTAAATCCC GGGAAGAGGGGT 黏性末端 平末端 思考：1.上面的末端各有几个游离的磷酸基团？ 2.将两个相同的黏性末端再连接起来的是哪种工具在起作用？ 它有什么特点？ 评DNA连接酶的特点和作用 将两个相同的黏性末端之间连接起来，即恢复被限制性核酸内切酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。 ——无特异性 两DNA片段要具有互补的黏性末端才能拼起来 DNA连接酶的缝合作用 可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来， 注意：DNA连接酶可连接双链DNA中的DNA单链缺口，但不能连接单链DNA！ 模型建构 思考：①将含有目的基因的DNA与质粒分别用EcoRⅠ酶切，酶切产物用DNA连接酶连接后，由两个DNA片段之间连接形成的产物有哪几种。 GATGGAATTCTTTCTTCAGTCGAATTCTGTCT CTACCTTAAGAAAGAAGTCAGCTTAAGACAGA ACTTGGATCCCGATAGAATTCTCCCCAATC TGAACCTAGGGCTATCTTAAGAGGGGTTAG 目的基因甲 载体甲 多个EcoRI组酶切后的载体与目的基因混合之后，加入DNA连接酶，连接产物是否只有一种？ 载体—目的基因（正向） 载体—目的基因（反向） 载体—载体（正、反） 目的基因—目的基因（正、反） 载体自身环化 目的基因自身环化 … … 原因：一种限制酶切割后产生的黏性末端只有一种，相同的黏性末端之间可以任意连接。 问：为了防止目的基因和质粒在酶切后产生的末端发生任意连接，有哪些措施呢？ 基因工程 ?