DNA遗传标记简介.pptx

DNA遗传标识介绍;Contents;一、第一代DNA遗传标识-DNA指纹; 什么是DNA指纹？;13个CODIS基因座以及Amelogenin在染色体上位置示意图; 在90年代初，包括复旦大学专家金力在内科学家和FBI合作，确定了13个STR，并论证说这13个STR在多种人群中，虽然亲属关系情况下，还是能较好辨别两个人。美国联邦调查局（FBI）公布了13个关键STR位点（简称CODIS），通过群体调查，被证明在各类人群中具有高度多态性，并通过FBI认证，目前已全面应用于各国法医学试验室，进行亲子判定和各类刑事案件犯罪嫌疑人排除和认定，以及大灾难性事故个体认定（如：塌方、矿井爆炸、飞机失事等）。 ;短串联反复序列(short tandem repeats, STR)或称微卫星DNA反复序列(microsatellite)是由长度为3-7个碱基正确短串连反复序列组成。这些反复序列广泛存在于人类基因组，平均6-10kb就出现一种，长度一般不大于400bp，且绝大多数位于非编码区。这些序列能够通过PCR来检测，扩增区域内反复序列反复次数不一样造成STR位点等位基因分型差异，在电泳分离后，通过放射性同位素，银染和荧光检测可区分不一样基因型。 STR具有分布广泛，信息量大，有高度多态性并遵循孟德尔共显性遗传等长处，目前已广泛应用于遗传制图、遗传连锁性分析、 亲子判定、 疾病基因定位和物种多态性研究、 组织移植评价等很多领域。与RFLP技术及PCR-VNTR技术相比，STR分型更适合微量、陈旧和降解样本检查。 ; 每个STR等位基因数是根据能产生反复次数来定，例如D3S1358，四个碱基次序反复次数有8，9，10，11，12，13，14，15共8种，其等位基因数就是8，这8个等位基因能够产生36种不一样基因型。假设也许基因数出现概率是同样话，例如对D3S1358来说，有36个基因型，那么某个特定人有某种基因型（9，15）概率就是1/36。这样这13个STR不一样基因型产生某个特定基因型组合就是随机概率是8.8x10(-22)。事实上，某个STR不一样基因型在人群中出现概率是不一样；同样基因型，在不一样人群中出现概率也会不一样。因此，要先从人群中做样本调查，建立资料库，建立多种STR基因不一样基因型在不一样人群中稳定概率，然后算出某个特定基因型组合随机出???也许概率。 ;STR新技术; STR商业应用;2023年Promega公司在全球率先推出经FBI认证一次扩增16个基因座DNA分型商品化试剂盒—PowerPlex 16系统。2023年，经FBI同意，升级版PowerPlex? 16 HS系统可被美国国家DNA索引系统（NDIS）有关试验室所使用，这些试验室参与生成了DNA图谱数据。 PowerPlex 16 HS系统于2023年3月上市，该试剂盒通过优化，可有效提升疑难法医样品检测成功率，简化建立罪犯数据库工作流程。这一新系统带有更强劲反应缓冲液，以及热启动Taq DNA聚合酶，这些特性较好地满足了上述技术需求。法医样品经常具有不利于DNA分型抑制剂，该系统中经优化反应缓冲液提升了对常规PCR抑制剂耐受性，虽然是棘手案件样品，也能得到良好成果。试剂盒性能亦得到了提升，能够对数据库样品进行直接分析，无需DNA纯化，这既能简化建立罪犯数据库工作流程，又能最后提升试验室工作效率。; Promega PowerPlex 16 HS System PowerPlex 16 HS系统能够进行16个基因座(15个STR位点和1个性别位点)复合扩增并用三色荧光进行检测. 在这些位点中D18S51, D21S11, TH01, D3S1358, Penta E用荧光素标识；FGA, TPOX, D8S1179, vWA和牙釉质蛋白基因用TMR标识；CSF1PO, D16S539, D7S820, D13S317, D5S818和Penta D用JOE标识。 所有16个位点在一管中同步扩增，然后通过单一进样或单一泳道进行电泳分析。PowerPlex 16 HS系统适用于ABI PRISM 310，3100和3100-Avant型 遗传分析仪，Applied Biosystems 3130和3130xl型遗传分析仪上进行电泳分析。; ABI AmnFLSTR Identifier PCR AmpFLSTR Identifiler PCR扩增试剂盒采取最新荧光技术（五色荧光，一种泳道），实现了16个STR位点同步扩增同步检测。在这些位点中D18S51, D19S433, TPOX和vWA用NED染料标识； Amelogenin, D5S818和FGA用PET染料标识； D2S1338, D3