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dbdb小鼠生物学特性研究 糖尿病是一种危害人类健康的重要疾病。在过去的20年中，中国的糖尿病发病率迅速增加，患者数量接近9000万。合适的糖尿病动物模型在糖尿病的发病机制研究及其并发症的治疗、药物的开发过程中都发挥着极其重要的作用。db/db小鼠是目前应用于研究人类2型糖尿病最好的动物模型之一。小鼠的生物学特性及生理生化指标是多种实验中常见的重要参考值, 也是判断动物健康状态的标准, 同时也是选择实验动物的依据之一。本实验从体质量、空腹血糖水平、摄食量、饮水量、血清中主要指标、胰腺免疫组化双重染色及主要脏器的病理学检查等方面, 对14~21周龄db/db小鼠进行生理学特性的检测, 为该小鼠在糖尿病研究中的应用提供参考。 1 材料和方法 1.1 材料表面 1.1.1 实验动物和饲养管理 SPF级db/db小鼠和db/m小鼠, 均由南京鹏晟生物科技发展有限公司提供。许可证编号SCXK (苏) 2009-0001, 合格证编号2022065。饲养于天津市新药安全评价研究中心实验动物屏障系统[实验动物使用许可证号:SYXK (津) 2011-0005]。饲料为SPF大鼠料, 由北京科澳协力饲料有限公司生产[生产合格证号:SCXK (京) 2009-0012]。动物饮用水为北京凯弗隆北方水处理设备有限公司生产的KFRO—400GPD型纯水机制备的纯净水。设施环境温度、湿度、换气次数由中央系统自动控制, 温度维持在20~26℃, 相对湿度维持在40%~70%, 通风次数为10~15次/h全新风, 光照为12 h明、12 h暗。动物的日常饲养管理由动物保障部负责, 每日为动物提供足够的块料和新鲜的饮用水。饮水瓶每周灭菌处理一次。 1.1.2 酶标准溶剂及仪器 葡萄糖, 天津市化学试剂一厂, 批Insulin (Mouse) Ultrasensitive ELISA试剂盒 (批号02423) 、Glucagon (Human, Mouse, Rat) ELISA试剂盒 (批号110913) 均由ALPCO生产。Anti-Glucagon antibody[K79b B10] (ab10988) (批号GR22269-1) 、Anti-Insulin antibody (ab63820) (批号GR58531-1) 、EXPOSE Mouse Specific AP (red) Detection IHC Kit (ab94740) (批号GR47563-1) 、EXPOSE Rabbit specific HRP/DAB detection IHC Kit (ab80437) (批号GR54603-1) 均由Abcam生产。总胆固醇 (TC) 测定试剂盒, 中生北控生物科技股份有限公司生产, 批号110821。三酰甘油 (TG) 测定试剂盒, 中生北控生物科技股份有限公司生产, 批号110551。Varioskan Flash型酶标仪, 美国Thermo公司。Columbus型洗板机, 奥地利日升。日立7080全自动生化仪, 日本日立株式会社。GG T2000电子天平, 美国双杰兄弟 (集团) 有限公司常熟双杰测试仪器厂。PL203型电子天平, 梅特勒托利多仪器 (上海) 有限公司。卓越型 (ACCU-CHEK) 罗氏血糖仪及检测试纸条, Roche Diagnostics Gmbh。 1.2 方法 1.2.1 模型的制备 实验选用12周龄基因缺陷型2型糖尿病模型动物db/db小鼠, 雌雄各半、预适应1周后尾静脉针刺采血测定3次血糖值 (禁食4 h, 间隔1 d) , 选择平均血糖值13.0 mmol/L的db/db小鼠雌雄各5只 (共10只) 为模型组。选用与模型组同周龄的健康db/m小鼠雌雄各5只 (共10只) 作为对照组。小鼠雌雄分笼饲养, 即每组2笼, 每笼各5只。 1.2.2 模型小鼠血糖 于14周龄开始, 每日定时用电子天平称量每笼小鼠饮水瓶质量和食料质量, 计算每只动物每日饮水量、摄食量。饮水量= (前一天饮水瓶质量-当天饮水瓶质量) /5。食量= (前一天料质量-当天料质量) /5。每周测定模型组和对照组动物体质量。对14、16、18、21周龄db/db小鼠使用血糖仪测定禁食4 h (不禁水) 空腹血糖水平, 对21周龄db/db小鼠进行糖耐量测试, 各组ig给予1 g/kg的葡萄糖 (10%葡萄糖溶液, 10μL/g) , 分别测定药前和负荷葡萄糖后30、60和120 min各组小鼠血糖水平, 血糖直接采用血糖仪测定尾静脉血。比较统计对照组和模型组不同周龄体质量、摄食饮水量及糖代谢的变化。 1.2.4 肝脏、胰腺组织切片观察 于21周龄, 糖耐量测试结束后, 动物脱椎处死, 剖杀, 取动物肝脏、胰腺置